鼻咽癌患者血漿游離EBV DNA定量檢測及其臨床意義.pdf

1、鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma，NPC)發(fā)病率在西方國家約1/10萬人年，但在我國、東南亞及地中海等地區(qū)卻具有顯著的地方性，尤其在我國華南其發(fā)病率高達(dá)25/10萬人年，發(fā)病率和死亡率均居于頭頸部惡性腫瘤之首。由于該腫瘤發(fā)病的隱匿性，早期癥狀不明顯，許多患者就診時已是中晚期，因此，發(fā)展敏感度和特異度兼具的篩查和早期診斷手段十分重要。近年來，隨著影像學(xué)、放射治療技術(shù)的進(jìn)步和多學(xué)科綜合治療的發(fā)展，鼻咽癌的局控率和遠(yuǎn)期

2、生存預(yù)后均有了大幅提高，早期腫瘤的5年生存率達(dá)90％以上。然而在晚期腫瘤中，伴隨局控率的提高，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移卻仍舊沒有明顯改善，尋求更有效的治療手段及治療方案的個體化勢在必行。
　　在流行地區(qū)鼻咽癌的病因和發(fā)病學(xué)中，EB病毒(Epstein-Barr virus，EBV)具有特殊地位，其相關(guān)的血清學(xué)指標(biāo)如VCA IgA，EA IgA等被廣泛用于臨床診斷與篩查，但其不能及時反映體內(nèi)腫瘤情況，即便在腫瘤完全緩解后，其滴度仍相當(dāng)高。相較之下，

3、熒光實時定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-time polymerase chainreaction，RT-PCR)測定的血漿游離EBV DNA(Cell-free plasma EBV DNA，cfEBVDNA)被視作更具價值的腫瘤相關(guān)生物標(biāo)志物，在鼻咽癌診斷與評估、長期生存預(yù)后方面具有積極意義。然而，目前相關(guān)數(shù)據(jù)來自多個研究中心，其檢測方法不統(tǒng)一，定量結(jié)果差別極大，因此尚無法整合得到統(tǒng)一的量化指標(biāo);另一方面，其產(chǎn)生和入血的機(jī)制和環(huán)節(jié)尚不明

4、確，如何與臨床診治有機(jī)結(jié)合，仍有待進(jìn)一步證據(jù)支持。
　　基于以上背景，本實驗分為基礎(chǔ)和臨床兩大部分，旨在探討血漿游離EBVDNA定量方法的優(yōu)化，治療前濃度的主要影響因素及其可能入血機(jī)制，與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的可能關(guān)系，以及將其應(yīng)用于治療近期療效評估的合理性與可行性。首先在小樣本血漿樣品中，分別應(yīng)用含目的片段的重組標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)粒DNA和Namalwa人淋巴瘤細(xì)胞基因組DNA（目前最主流的兩種定量參照）作為絕對定量標(biāo)準(zhǔn)品，通過平行測定對比及反復(fù)復(fù)測

5、，評價兩種定量方法的優(yōu)劣，并擇優(yōu)進(jìn)行后續(xù)大樣本臨床檢測。此后，通過對比治療前不同濃度血漿游離EBV DNA及其臨床和影像學(xué)上的浸潤和轉(zhuǎn)移特征，通過多元線性模型尋找影響該指標(biāo)的最顯著因素，建立線性模型進(jìn)行預(yù)測和歸納，進(jìn)而探討在腫瘤發(fā)生發(fā)展中，影響EBVDNA入血的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。最后，觀察分析放化療前后血漿游離EBV DNA的變化情況，并和反映腫瘤負(fù)荷變化的影像學(xué)緩解評估手段進(jìn)行對比，討論其是否能夠用于腫瘤早期緩解評估。為此，研究先行對比了三維

6、腫瘤大體體積(Gross tumorvolume，GTV)金標(biāo)準(zhǔn)下，一維和二維徑線測定法反映鼻咽癌腫瘤負(fù)荷的能力，并從WHO標(biāo)準(zhǔn)和實體瘤療效評價標(biāo)準(zhǔn)(Response evaluation criteria in solidtumors，RECIST)中擇優(yōu)作為最佳影像學(xué)評估手段。實驗發(fā)現(xiàn):
　　1.相對標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)粒DNA，Namalwa DNA標(biāo)準(zhǔn)品的濃度范圍更加合理，能覆蓋幾乎全部待測樣本，不會過高測定，并且其復(fù)測穩(wěn)定性更高，因

7、此更適合用作血漿游離EBV DNA的絕對定量。
　　2.治療前血漿游離EBV DNA的濃度和臨床T、N分期，原發(fā)腫瘤侵犯范圍和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移特性等均相關(guān)，但各因素間存在重疊。經(jīng)多元線性模型篩選后，發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)體積為最顯著的影響因素，其他因素包括顱底骨質(zhì)受累，下頸部（含鎖骨上）淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等。三者分別可導(dǎo)致血漿游離EBV DNA升高至原先5，4.2和6.7倍。
　　3.在不同的治療模式下，多數(shù)患者血漿游離EBV DNA隨腫瘤退縮發(fā)生明

8、顯下降。而個別患者中，治療結(jié)束時高載量EBV DNA預(yù)示腫瘤未控和治療后進(jìn)展。在反映腫瘤實際負(fù)荷上，WHO二維徑線測定法優(yōu)于RECIST1.1一維法。將其作為近期療效的影像學(xué)評估手段，與血漿游離EBV DNA變化進(jìn)行對比后發(fā)現(xiàn)，后者在反映腫瘤緩解上更為敏感，且其持續(xù)陽性提示腫瘤殘留，尤其是淋巴結(jié)殘留。
　　綜上，本實驗得出以下結(jié)論:Namalwa細(xì)胞基因組DNA較質(zhì)粒DNA更適于作為鼻咽癌血漿游離EBV DNA定量的標(biāo)準(zhǔn)品;大體積