AtNHX1基因和codA基因轉(zhuǎn)化藍(lán)漿果.pdf

1、本研究以藍(lán)漿果品種伯克利和藍(lán)豐為材料，采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法和超聲波輔助農(nóng)桿菌介導(dǎo)法，將Na<'+>/H<'+>反向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白AtNHX1基因和膽堿氧化酶基因coda導(dǎo)入伯克利和藍(lán)豐中，以獲得耐鹽堿新品系。研究結(jié)果如下： 1．以兩個(gè)北高叢藍(lán)漿果和一個(gè)兔眼藍(lán)漿果品種為試材，取單芽莖段為外植體，研究影響其離體繁殖的因素，篩選適宜的離體增殖和生根培養(yǎng)基。試驗(yàn)結(jié)果表明：兔眼藍(lán)漿果品種粉藍(lán)在改良1/2MS+ZT3 mg·L<'-1>培養(yǎng)基上初代培

2、養(yǎng)后成活率可達(dá)100％，培養(yǎng)4w后，增殖系數(shù)為2.8。北高叢藍(lán)漿果伯克利和藍(lán)豐品種在添加了2-iplomg·L<'-1>和5mg·L<'-1>改良1/2MS培養(yǎng)基上的成活率分別為90％和86.7％；伯克利和藍(lán)豐在改良1/2MS+ZT5mg·L<'-1>培養(yǎng)基上繼代培養(yǎng)4w后，增殖系數(shù)最高，分別為6.2和4.8。 2．以藍(lán)漿果品種伯克利和藍(lán)豐的葉片為農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化受體，通過對(duì)gus基因瞬時(shí)表達(dá)率和轉(zhuǎn)化葉片再生情況的分析，研究它們的

3、遺傳轉(zhuǎn)化體系的最佳實(shí)驗(yàn)參數(shù)。實(shí)驗(yàn)表明侵染5min，共培養(yǎng)4d，伯克利暗處理1w，藍(lán)豐暗處理3w，添加AS80mg·L<'-1>，Km20mg·L<'-1>、Cef 250mg·L<'-1>時(shí)gus基因瞬時(shí)表達(dá)率最高。 3．本實(shí)驗(yàn)研究了不同的超聲波處理時(shí)間結(jié)合超聲波處理功率，確定了侵染前一定范圍內(nèi)的超聲波處理對(duì)農(nóng)桿菌介導(dǎo)藍(lán)漿果轉(zhuǎn)基因有促進(jìn)作用。80W功率的超聲波處理2s，超聲波輔助農(nóng)桿菌介導(dǎo)AtNHX1基因轉(zhuǎn)化藍(lán)豐，能獲得交稿的g

4、us基因瞬時(shí)表達(dá)率(55％)、較高的葉片不定芽再生率(23.33％)及較低的外植體褐化率(23.67％)；100W功率的超聲波處理6s，超聲波輔助農(nóng)桿菌介導(dǎo)codA基因轉(zhuǎn)化伯克利的效果最好，gus基因瞬時(shí)表達(dá)率為73.33％，外植體的褐化率為22％，葉片不定芽再生率為33.08％。 4．本研究將．AtNHX1基因和codA基因分別通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法和SAAT法轉(zhuǎn)化兩個(gè)藍(lán)漿果的品種伯克利和藍(lán)豐，均獲得了具有Km抗性株系。轉(zhuǎn)化AtNH