采用PMI作為標(biāo)記基因進(jìn)行藍(lán)豬耳轉(zhuǎn)化的研究.pdf

1、轉(zhuǎn)基因技術(shù)日益成為生物性狀和質(zhì)量改良的重要手段,并為人類帶來巨大收益,但是由于目前大多使用抗生素抗性基因和抗除草劑類基因作為標(biāo)記基因,對環(huán)境和人類健康存在或潛藏著無法評估的不良影響和損害,從而限制了轉(zhuǎn)基因作物在商業(yè)生產(chǎn)中的推廣利用.目前解決這一問題最有效的方法就是利用無爭議的生物安全標(biāo)記基因.本論文研究目的就是如何應(yīng)用安全標(biāo)記基因PMI(6-磷酸甘露糖異構(gòu)酶)進(jìn)行熱帶地被型觀賞花卉藍(lán)豬耳的遺傳轉(zhuǎn)化.本研究在前人工作的基礎(chǔ)上首先對藍(lán)豬耳葉

2、再生體系進(jìn)行優(yōu)化,確定葉片誘愈培養(yǎng)基以MS+6-BA1.0 mg·L<'-1>+2,4-D 0.1 mg·L<'-1>為最佳,愈傷誘芽和葉片直接誘芽都以1/2MS+6-BA 1.0 mg·L<'-1>+NAA 0.1 mg·L<'-1>為最佳,小苗在1/2MS培養(yǎng)基中即可生根,再生效率高.另外,本論文研究過程中還首次建立了藍(lán)豬耳的根再生體系,發(fā)現(xiàn)幼嫩根段在1/2MS+0.5-1.5 mg·L<'-1>TDZ的培養(yǎng)基上愈傷誘導(dǎo)頻率高,愈傷

3、轉(zhuǎn)移到1/2MS+BA1 mg·L<'-1>+NAA0.1 mg·L<'-1>的誘芽培養(yǎng)基上,植株再生率達(dá)100﹪,考慮到愈傷誘導(dǎo)過程中基因變異的頻率和試驗成本,認(rèn)為先以含有0.5mg·L<'-1>TDZ的1/2MS上誘愈,20天左右轉(zhuǎn)入誘芽培養(yǎng)基1/2MS+6-BA 1.0 mg·L<'-1>+NAA 0.1 mg·L<'-1>然后將高約1cm的小芽轉(zhuǎn)入1/2MS培養(yǎng)基為根高效再生的最佳組合.本研究建立了藍(lán)豬耳的根再生體系,并為花卉植