先兆子癇病理相關(guān)基因的克隆.pdf

1、第一軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文先兆子癇病理相關(guān)基因的克隆姓名：張克榮申請學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：婦產(chǎn)科指導(dǎo)教師：邢福祺龐戰(zhàn)軍20030528先兆子癇病理相關(guān)基因的克隆中文摘要目的：應(yīng)用抑制性消減雜交克隆技術(shù)，初步篩選出與先兆子癇有關(guān)的高表達(dá)基因和／或新基因，并進(jìn)一步在大樣本中觀察篩選出的基因表達(dá)情況，為明確先兆子癇基因?qū)W病理機(jī)制提供理論依據(jù)。方法：我們以先兆子癇胎盤和正常妊娠胎盤為研究對象，采用抑制性消減雜交技術(shù)、基因克隆等技術(shù)，篩選出與先兆子癇

2、有關(guān)的高表達(dá)基因和戚新基因。在標(biāo)本的采集上，盡量減少孕婦其它因素對該研究的影響，如標(biāo)本均選取剖宮產(chǎn)胎盤，孕婦年齡、孕周、胎次、婚史等盡可能接近，同時(shí)排除高血壓、腎臟疾病史。1、采用一步法提取總RNA方法，分別從先兆子癇病人和正常妊娠分娩胎盤中提取總RNA，采用磁珠分離系統(tǒng)進(jìn)一步分離出mRNA。紫外分光光度計(jì)檢測其濃度，測定A260／A280nm、A260／A230um吸光度值以估計(jì)RNA樣品的純度，甲醛變性膠電泳分析RNA的完整性：2、

3、采用抑制性消減雜交技術(shù)，以mRNA為逆轉(zhuǎn)錄模板合成eDNA，進(jìn)行兩次雜交和兩次PCR擴(kuò)增，并對擴(kuò)增產(chǎn)物、消減效率進(jìn)行分析；3、PCR產(chǎn)物轉(zhuǎn)入活化的JMl09大腸桿菌中，克隆并進(jìn)行藍(lán)／白斑篩選，從而成功構(gòu)建出消減cDNA文庫；4、對構(gòu)建的先兆子癇胎盤消減cDNA文庫，采用反向雜交驗(yàn)證，挑選出先兆子癇中的高表達(dá)基因，并測序分析；5、對測序發(fā)現(xiàn)的先兆子高表達(dá)基因在大樣本胎盤mRNA進(jìn)行斑點(diǎn)雜交觀察其表達(dá)情況，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析其意義。結(jié)果：1、總RN