組織工程皮的構(gòu)建和生物安全性研究.pdf

1、目的：皮膚是人體最大的器官，具有高度復雜的結(jié)構(gòu)和功能，有重要的屏障和保護作用，不僅能防止外界刺激損傷體內(nèi)的組織、阻擋異物和病原體侵入，而且可以阻止體液外滲和對外界物質(zhì)的吸收，還具有調(diào)節(jié)體溫、參與免疫應答等作用。燒傷、創(chuàng)傷、糖尿病潰瘍、褥瘡等原因都會導致皮膚缺損或功能缺失，不僅造成患者肉體痛苦，也給患者造成心靈的創(chuàng)傷。各種原因造成的皮膚缺損，尤其是大面積燒傷患者常常因不能及時植皮、有效的修復創(chuàng)面而導致創(chuàng)面感染、體液丟失、臟器功能不全等與皮

2、膚缺損相關(guān)的并發(fā)癥，甚至死亡。因此，臨床上需要盡快修復創(chuàng)面以減少機體損耗、維持機體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定、防止微生物入侵，以預防并發(fā)癥的發(fā)生都非常重要。盡管大面積燒傷病人的治療已取得很大進展，但如何早期覆蓋創(chuàng)面、迅速恢復皮膚的屏障功能一直因為缺乏合適的創(chuàng)面覆蓋物而成為治療中必須解決的最迫切的問題。因此，皮膚創(chuàng)面覆蓋物或組織工程皮膚受到了越來越多的重視。我們本研究的目的是構(gòu)建組織工程皮并對其生物安全性進行初步的研究評價。
　　 方法：1、組

3、織工程皮的構(gòu)建：無菌條件下取正常人體包皮或耳后皮膚，經(jīng)分離培養(yǎng)得到皮膚表皮角質(zhì)細胞和成纖維細胞，將成纖維細胞和角質(zhì)細胞同時接種在生物支架材料上，37℃，5％CO2培養(yǎng)10～14天經(jīng)活性檢測合格后即可使用。
　　 2、組織工程皮的生物安全性研究：主要進行了組織工程皮的皮膚刺激試驗、致敏性試驗、急性毒性試驗、細胞毒性試驗、溶血試驗、植入試驗以及熱原、支原體的檢查。其評價標準依據(jù)《醫(yī)療器械生物學評價》進行評定。
　　 結(jié)果：1

4、、組織工程皮的構(gòu)建：角質(zhì)形成細胞培養(yǎng)3～5天后并向四周擴展，可增殖形成集落，成纖維細胞分散培養(yǎng)24h后，部分細胞鋪展成梭形，匯合成片后細胞呈梭形、束狀排列，也有部分呈不規(guī)則形，細胞間以細長突起相互交聯(lián)。組織工程皮在培養(yǎng)10～14天后，具有表皮、真皮雙層結(jié)構(gòu)，且具有細胞活性。
　　 2、組織工程皮的生物安全性研究：組織工程皮的皮膚刺激試驗原發(fā)刺激指數(shù)為0.25<0.4，未見任何刺激反應，無紅斑、焦痂、水腫等皮膚反應現(xiàn)象，致敏性試驗

5、、急性毒性試驗以及熱原、和支原體的檢查結(jié)果均為陰性，細胞毒性試驗結(jié)果脫色指標/溶解指標：陰性對照0/0，樣品0/0，陽性指標4/5。溶血試驗中溶血率小于2.5％，且陰性對照管的吸光度不大于0.03；陽性對照管的吸光度值為0.8±0.3。植入試驗中的植入物對大鼠創(chuàng)口愈合無影響，植入物逐漸被大鼠吸收。
　　 結(jié)論：1、角質(zhì)形成細胞與成纖維細胞混合接種在生物載體膜上，經(jīng)培養(yǎng)后增殖分化，可以擴大皮源，為大面積深度燒傷患者提供了皮源。利用