組織工程肝單元構(gòu)建的研究.pdf

1、本文將骨髓來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞種植在聚乳酸羥基乙酸材料支架上以構(gòu)建組織工程肝單元。首先，在成功擴(kuò)增人骨髓來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞的基礎(chǔ)之上，體外觀察人骨髓來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞在誘導(dǎo)劑作用下向肝細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞分化的潛能，并對(duì)誘導(dǎo)后細(xì)胞從形態(tài)學(xué)、功能學(xué)、表型等方面進(jìn)行了鑒定。結(jié)果表明：骨髓來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞作為組織工程的優(yōu)秀種子細(xì)胞，在體外適當(dāng)條件下可分別向血管內(nèi)皮細(xì)胞、肝細(xì)胞分化，在分化過(guò)程中，Matrigel、纖維蛋白凝膠、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子、堿性

2、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子與成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子4及誘導(dǎo)后表達(dá)的flt-1、flk-1等表面分子提供了適宜的微環(huán)境并起著重要作用。我們還進(jìn)行了肝單元支架包括包裝盒、二分叉血管支架多層管壁結(jié)構(gòu)的設(shè)計(jì)與材料篩選及顯微結(jié)構(gòu)優(yōu)化。結(jié)果表明：在膠原、殼聚糖、聚乳酸羥基乙酸、聚L-乳酸和聚氨酯彈性體等組織工程最常用的材料中，聚氨酯以及聚乳酸羥基乙酸材料具有較好的血液相容性，對(duì)骨髓來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞都具有良好的相容性，其中聚乳酸羥基乙酸

3、材料的細(xì)胞相容性優(yōu)于聚氨酯；使用NaCl顆粒制孔/浸出法制備的多孔聚乳酸羥基乙酸薄膜微孔平均孔徑，主要取決于NaCl顆粒的粒徑，材料的孔隙率主要取決于NaCl顆粒的比例；骨髓來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞與NaCl比例為75％、粒徑范圍為30～50μm的聚乳酸羥基乙酸支架體外結(jié)合，不僅具有理想的生物相容性，且不失其向有功能的內(nèi)皮細(xì)胞分化的潛能。我們進(jìn)一步將骨髓來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化細(xì)胞與生物支架相結(jié)合，進(jìn)行體內(nèi)移植以構(gòu)建組織工程肝單元。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：骨

4、髓來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞在體內(nèi)聚乳酸羥基乙酸支架上可分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞，后者自支架管壁游離趨化，進(jìn)而形成與體內(nèi)循環(huán)相交通的毛細(xì)血管；骨髓來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞在體內(nèi)與聚乳酸羥基乙酸支架材料相結(jié)合，分別向肝細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化，獲得具備血管系統(tǒng)的活的組織工程肝臟—肝單元。本研究證實(shí)此構(gòu)建組織工程肝單元的方法，可用于制備肝功能不全時(shí)的輔助功能結(jié)構(gòu)單位，并進(jìn)一步以此為基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)構(gòu)建包含膽道系統(tǒng)、Kuffer細(xì)胞在內(nèi)的完整的肝單元，為最終組織工程肝臟移