絕經(jīng)后壓力性尿失禁患者盆底組織中ER、TGF-β-,1-和CollagenⅠ、Ⅲ的研究.pdf

1、壓力性尿失禁(Stress Urinary Incontinence,SUI)是常見(jiàn)的老年性疾病,幾乎所有的下尿路癥狀及許多陰道癥狀都可見(jiàn)于壓力性尿失禁.1977年,國(guó)際尿控協(xié)會(huì)(International Continence Society,ICS)給SUI下了一個(gè)定義:膀胱內(nèi)壓超過(guò)最大尿道壓時(shí),在缺乏逼尿肌收縮的情況下,所出現(xiàn)的社會(huì)學(xué)和衛(wèi)生學(xué)不能接受的不自覺(jué)漏尿,并影響患者的生活.腹壓增加下的漏尿是最典型的癥狀,而尿急、尿頻,急迫

2、尿失禁和排尿后脹滿感亦是常見(jiàn)的癥狀.SUI常同時(shí)合并生殖器官的膨出和脫垂.50～65歲的婦女25﹪患有尿失禁,而且隨著年齡的增長(zhǎng)發(fā)病率還會(huì)相應(yīng)的增加.SUI占整個(gè)尿失禁發(fā)病率的50﹪以上,其實(shí)際發(fā)病率比臨床統(tǒng)計(jì)數(shù)值更高.由于其癥狀的特殊性常會(huì)給老年婦女帶來(lái)巨大生理和心理上的痛苦,并造成嚴(yán)重的社會(huì)經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān).絕經(jīng)后SUI和盆腔器官脫垂(Pelvic Organ Prolapse,POP)的發(fā)生率明顯增高,提示SUI及POP的發(fā)生與雌激素缺乏

3、有關(guān),雌激素對(duì)靶器官的作用是通過(guò)雌激素受體(Estrogen Receptor,ER)完成的.近年研究提示,女性SUI患者盆底支持組織膠原蛋白(Collagen)含量顯著減少,而膠原蛋白I(Collagen I)和膠原蛋白Ⅲ(Collagen Ⅲ)是膠原蛋白家族中起支持和彈性作用的主要成分,可能是由于它們的減少導(dǎo)致盆底支持組織彈性減弱,出現(xiàn)盆底松弛,進(jìn)而導(dǎo)致SUI的產(chǎn)生.而轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子一β<,1>(Transforming Growth

4、 Factor,TGF-β<,1> )的一個(gè)重要的生物學(xué)作用是調(diào)節(jié)膠原合成,能增加以膠原為主的間質(zhì)蛋白質(zhì)的合成,在組織器官纖維化形成過(guò)程中起作用. 為研究SUI的發(fā)生機(jī)制了解盆底起支持作用的結(jié)締組織中膠原蛋白的改變,以及引起這種膠原蛋白改變的原因,同時(shí),觀察盆底結(jié)締組織中雌激素受體的改變,探討它們?cè)诮^經(jīng)后SUI發(fā)生、發(fā)展中的關(guān)系,我們利用免疫組化的方法觀察ER、TGF-β1、CollagenⅠ、Ⅲ在絕經(jīng)后SUI患者陰道前壁組織中

5、的表達(dá),為絕經(jīng)后婦女SUI的治療提供方法和思路. 材料與方法；1.研究對(duì)象選取2005年10月～2006年5月鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科收治的絕經(jīng)后SU工患者30例(SUI組)、盆腔器官脫垂的患者28例(POP組);并選擇同期非卵巢功能性腫瘤及宮頸上皮內(nèi)瘤變患者30例作為正常對(duì)照觀察(正常組),所選患者SUI、POP組均為絕經(jīng)后婦女,正常組為圍絕經(jīng)期婦女.SUI入選條件:符合SUI診斷標(biāo)準(zhǔn);近3個(gè)月內(nèi)未服用過(guò)激素類藥物.POP入

6、選條件:自訴無(wú)尿失禁癥狀,經(jīng)指壓試驗(yàn),棉簽試驗(yàn)及尿動(dòng)力檢查證實(shí)無(wú)尿失禁;婦科檢查均有中度以上陰道前壁膨出;近個(gè)月內(nèi)未服用激素類藥物.正常組入選條件:無(wú)尿失禁癥狀;婦科檢查無(wú)陰道壁膨出或子宮脫垂,近3個(gè)月內(nèi)未服過(guò)用激素類藥物;術(shù)后病理檢查證實(shí)為非子宮內(nèi)膜異位癥等雌激素相關(guān)疾病. 正常組和POP組采用陰式子宮切除術(shù)和開腹子宮切除術(shù);SUI組采用經(jīng)陰道無(wú)張力尿道中段懸吊(tension-free vagina tape,TVT)術(shù)或B

7、lJrch手術(shù).術(shù)中提取患者陰道前壁12點(diǎn)處組織.取下的組織立即放入加有中性緩沖液的10﹪的甲醛溶液中固定24h,之后用石蠟包埋標(biāo)本,切片厚度為3μm.部分組織切片行HE染色,以明確組織學(xué)結(jié)構(gòu).2.方法采用免疫組化方法處理切片.經(jīng)微波處理后,采用SP法,ER、TGF β.和CollagenⅠ、Ⅲ抗體及SP試劑盒均購(gòu)自北京中杉公司,同時(shí)設(shè)對(duì)照組.切片常規(guī)脫蠟水化,0.3﹪H<,2>O,阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶,非免疫性羊血清封閉,依次加一抗、

8、二抗及鏈霉素一過(guò)氧化物酶,DAB顯色,蘇木素復(fù)染,透明封片.用PBS液代替一抗、二抗作陰性對(duì)照.對(duì)每張切片高倍鏡下觀察計(jì)數(shù)細(xì)胞核ER染色陽(yáng)性的細(xì)胞數(shù)(因ER陽(yáng)性細(xì)胞少,均以同種細(xì)胞中ER陽(yáng)性率表示ER染色情況).經(jīng)ER染色,細(xì)胞核顯示棕黃色為ER陽(yáng)性.以乳腺癌作為陽(yáng)性對(duì)照,磷酸鹽緩沖液代替ER單克隆抗體作為陰性對(duì)照.轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子TGF-β<,1>陽(yáng)性著色呈棕黃色主要位于胞漿,部分定位于胞膜,以每一組切片中陽(yáng)性細(xì)胞所占的百分比為:陰性(-

9、),陽(yáng)性細(xì)胞≤10﹪:弱陽(yáng)性(+),陽(yáng)性細(xì)胞11﹪～30﹪:陽(yáng)性(++),陽(yáng)性細(xì)胞31﹪～70﹪,強(qiáng)陽(yáng)性(+++),陽(yáng)性細(xì)胞71﹪～100﹪.TGF-β<,1>表達(dá)的陽(yáng)性率按每組(+)～(+++)的標(biāo)本總數(shù)除以每組的總標(biāo)本數(shù)來(lái)計(jì)算.CollagenⅠ、Ⅲ則以其陽(yáng)性表達(dá)的輝度值作為比較對(duì)象進(jìn)行比較. 3.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有數(shù)據(jù)采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行處理,兩組均數(shù)間比較采用t檢驗(yàn);各組間的均數(shù)比較用單因素方差分析;樣本率的比

10、較用卡方檢驗(yàn);相關(guān)分析采用Pearson相關(guān)分析.各檢驗(yàn)方法均以α=0.05為檢驗(yàn)顯著性水準(zhǔn). 結(jié)果 1.ER的表達(dá)3 組患者陰道前壁組織中,ER陽(yáng)性率均不高,在SUI組、POP組及正常組分別為1.66﹪、1.83﹪、2.64﹪.SUI組與正常組比較,差異有極顯著性(p<0.05);POP組與正常組比較,差異有極顯著性(p<0.05);SUI組與POP組比較,差異無(wú)顯著性(p<0.05). 2.TGF-β<,1>

11、表達(dá)SUI組、POP組及正常組患者陰道前壁組織中,TGF-β<,1>表達(dá)陽(yáng)性率分別為20.00﹪、14.30﹪、93.33﹪,SUI組與對(duì)照組比較,差異有極顯著性(p<0.05);POP組與正常組比較,差異有極顯著性(p<0.05):SUI組與POP組比較,差異無(wú)顯著性(p>0.05). 3.Collagen Ⅰ、Ⅲ的表達(dá)3 組患者陰道前壁組織中Collagen Ⅰ含量的表達(dá)以輝度值為標(biāo)準(zhǔn),在SUI組、POP組及正常組分別為98

12、.62±0.28、98.15±O.40和100.03±0.27.SUI組與正常組比較,差異有極顯著性(p<0.05);POP組與正常組比較,差異有極顯著性(p<0.05);SUI組與POP組比較,差異無(wú)顯著性(p>0.05).3組患者陰道前壁組織中Collagen Ⅲ含量的表達(dá)以灰度值為標(biāo)準(zhǔn),在SUI組、POP組及正常組分別為98.46±0.35、98.23±0.18和100.12±O.43.SUI組與正常組比較,差異有極顯著性(p<0

13、.05);POP組與正常組比較,差異有極顯著性(p<0.05);SUI組與POP組比較,差異無(wú)顯著性(p>0.05). 4.ER與Collagen Ⅰ、Ⅲ的相關(guān)性ER與Collagen I間相關(guān)系數(shù)r=0.226,t=2.15,/p=0.034,故p<0.05,ER與Collagen Ⅰ間呈正相關(guān).ER與Collagen Ⅲ間相關(guān)系數(shù)r=0.265,t=2.55,p=0.013,故p<0.05,ER與Collagen Ⅲ間呈正相

14、關(guān). 結(jié)論；1、絕經(jīng)后SUI患者陰道前壁組織中的ER水平低下,導(dǎo)致陰道前壁退行性病變,對(duì)尿道的支持力減弱,尿道閉合壓降低,可能通過(guò)此機(jī)制參與SUI的發(fā)生. 2、絕經(jīng)后SUI患者陰道前壁組織中的TGF-β<,1>減少,導(dǎo)致陰道前壁組織中以膠原為主的間質(zhì)蛋白減少,對(duì)尿道的支持力減弱,無(wú)法維持正常尿道閉合壓,可能通過(guò)此機(jī)制參與SUI的發(fā)生. 3、絕經(jīng)后SUI患者陰道前壁組織中的Collagen Ⅰ、Ⅲ含量水平低下,直接