大黃酸對(duì)糖尿病大鼠腎臟中神經(jīng)肽Y及其Y1、Y2受體表達(dá)的影響.pdf

1、糖尿病腎病(DN，diabetic nephropathy)是糖尿病(DM，diabetesmellitus)常見的慢性并發(fā)癥之一，在DM患者中約30％會(huì)發(fā)生DN。目前，在歐美國家，DN是引發(fā)終末期腎病(ESRD，end stage renal disease)的首要原因。然而糖尿病腎病的發(fā)病機(jī)制尚未完全明確，且目前尚無特效的治療方法。糖尿病腎病的發(fā)病因素包括：血糖控制不佳、高血脂、腎臟的血液動(dòng)力學(xué)異常等。大量文獻(xiàn)報(bào)道神經(jīng)肽Y(NPY，

2、neuropeptide Y)及其受體與糖尿病及其并發(fā)癥的發(fā)病密切相關(guān)，但糖尿病狀態(tài)下腎臟中NPY及其Y1、Y2受體表達(dá)的情況，尚未明了。大黃酸是中藥大黃的主要成分，具有降糖調(diào)脂、防治糖尿病腎病等廣泛的藥理作用，但對(duì)其機(jī)制研究較少。本實(shí)驗(yàn)以鏈脲佐菌素(STZ，streptozotocin)建立糖尿病大鼠模型，探討腎臟中NPY及其Y1、Y2受體表達(dá)變化情況，同時(shí)觀察大黃酸的治療效果，旨在闡明大黃酸腎臟保護(hù)作用的可能機(jī)制。
　　第一部

3、分大黃酸對(duì)糖尿病大鼠腎臟的保護(hù)作用
　　目的：驗(yàn)證大黃酸對(duì)糖尿病大鼠糖脂代謝、腎臟病理變化的影響。
　　方法：8周齡健康雄性Wistar大鼠，體重200-220g(由復(fù)旦大學(xué)醫(yī)學(xué)動(dòng)物中心提供，清潔級(jí))。在光/暗周期為12h/12h(光照時(shí)間7:00-19:00)的條件下飼養(yǎng)于鐵籠中，自由獲得飼料和飲水。大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，腹腔內(nèi)一次性注射65mg/kg鏈脲佐菌素(溶于0.1 mmol/L、PH4.4的枸櫞酸緩沖液)誘導(dǎo)糖尿

4、病模型，正常對(duì)照組腹腔內(nèi)一次性注射等體積的枸櫞酸緩沖液。將糖尿病大鼠隨機(jī)分為糖尿病對(duì)照組(DM，n=12)和大黃酸治療組(DM-T，n=12)，并以體重量、鼠齡相匹配的正常大鼠作為正常對(duì)照組(NC，n=12)。從模型建立后第3天起，每日清晨給予大黃酸治療組大黃酸(100 mg·kg-1·d-1，使用前用0.5％羧甲基纖維素鈉配置成相應(yīng)濃度的懸液)灌胃，其它兩組用相同體積的溶劑灌胃，共10周。實(shí)驗(yàn)期間，所有大鼠均采用標(biāo)準(zhǔn)飲食，可自由飲水，

5、未使用任何降糖藥物。10周時(shí)，留取24h小時(shí)尿液測(cè)定24h尿蛋白定量，留取血標(biāo)本及腎臟組織，檢測(cè)空腹血糖(FBG，fasting blood glucose)、血脂及24h蛋白尿水平，糖原染(PAS，periodic acid schiff staining)觀察腎臟病理變化。
　　結(jié)果：大黃酸可降低糖尿病大鼠血糖、甘油三酯(TG，triglyceride)、總膽固醇(TC，total cholesterol)、24h蛋白尿水平(

6、P<0.01)，緩解糖尿病腎病的病理變化。
　　結(jié)論：大黃酸具有改善糖脂代謝紊亂，減輕DN病理變化的作用，這可能是其延緩DN的機(jī)制之一。
　　第二部分大黃酸對(duì)糖尿病大鼠腎臟中NPY及其Y1、Y2受體表達(dá)的影響
　　目的：從分子生物學(xué)角度闡明大黃酸治療DN的可能機(jī)理。
　　方法：造模、分組、給藥等同第一部分實(shí)驗(yàn)。取血完畢后，迅速取腎、下丘腦，采用放射免疫法、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、蛋白印跡等方法，觀察各組大鼠下丘腦、

7、腎臟中NPY濃度和腎臟中Y1、Y2受體基因、蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：與正常對(duì)照組相比，糖尿病大鼠下丘腦和腎臟中NPY濃度明顯升高(P<0.01)，腎臟中Y1和Y2受體的mRNA和蛋白表達(dá)增加(P<0.05)；大黃酸治療后NPY及其Y1、Y2受體表達(dá)量顯著低于糖尿病組(P<0.05)。
　　結(jié)論：10周糖尿病大老鼠腎臟中NPY及其Y1、Y2受體表達(dá)增加。大黃酸對(duì)STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠糖脂代謝紊亂、腎臟病變有一定程度的保護(hù)作用