慢性乙型病毒性肝炎肝郁脾虛和脾胃濕熱證轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究.pdf

1、目的:
　　應(yīng)用基因芯片技術(shù)，研究慢性乙型病毒性肝炎肝郁脾虛證和脾胃濕熱證患者差異基因表達(dá)譜變化(P＜0.05)，篩選出與證型相關(guān)的差異基因，找到差異基因所表達(dá)的基因功能，為慢性乙型病毒性肝炎中醫(yī)證型客觀化研究和辨證治療提供一定的依據(jù)。
　　方法:
　　本研究在前期課題組臨床調(diào)研及文獻(xiàn)研究結(jié)果基礎(chǔ)上，選取慢性乙型病毒性肝炎臨床常見(jiàn)證候肝郁脾虛證和脾胃濕熱證進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究。以成都市傳染病醫(yī)院、四川大學(xué)華西醫(yī)院、成都中醫(yī)

2、藥大學(xué)附屬醫(yī)院收集的慢性乙型病毒性肝炎肝郁脾虛證和脾胃濕熱證患者及健康人為研究對(duì)象。將慢性乙型病毒性肝炎患者分為肝郁脾虛證組、脾胃濕熱證組，同時(shí)設(shè)立正常人群對(duì)照組。提取每例患者外周血液6ml加入已涂布EDTA的50ml離心管中，加入紅細(xì)胞裂解液，離心，洗滌，加入TRIZOL，將分離出的白細(xì)胞轉(zhuǎn)入1.5mlEP管中，得到要研究的樣品，將樣品用編號(hào)編好后放置于-80℃冰箱中保存。及時(shí)將樣本包裝后埋入含有干冰的泡沫箱中，嚴(yán)格密封后，通過(guò)快遞公

3、司空運(yùn)至上海伯豪生物技術(shù)有限公司。由上海伯豪生物技術(shù)有限公司技術(shù)人員完成樣品質(zhì)檢，全部合格后進(jìn)入實(shí)驗(yàn)階段，提取RNA，逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，運(yùn)用基因芯片進(jìn)行芯片雜交及掃描，完成基因芯片的制備。最后在SAS軟件中完成肝郁脾虛證和脾胃濕熱證差異基因的篩選，并對(duì)差異基因進(jìn)行功能顯著性分析。
　　結(jié)果:
　　(1)按照P-value＜0.05的標(biāo)準(zhǔn)篩選出肝郁脾虛證相關(guān)的1401個(gè)差異表達(dá)探針，其中包括592個(gè)上調(diào)及809個(gè)下調(diào)。有功能注

4、釋的差異基因939條。(2)照P-value＜0.05的標(biāo)準(zhǔn)篩選出脾胃濕熱證相關(guān)的2011個(gè)差異表達(dá)探針，其中包括807個(gè)上調(diào)及1204個(gè)下調(diào)。有功能注釋的差異基因1376條。(3)對(duì)與肝郁脾虛證相關(guān)差異基因功能顯著性分析發(fā)現(xiàn):差異基因所表達(dá)的功能主要為對(duì)外界刺激的反應(yīng)、碳水化合物的結(jié)合、多細(xì)胞機(jī)體應(yīng)激反應(yīng)）、細(xì)胞發(fā)育、生長(zhǎng)發(fā)育等。(4)對(duì)與脾胃濕熱證相關(guān)的差異基因功能顯著性分析發(fā)現(xiàn):差異基因所表達(dá)的基因功能主要為解剖學(xué)形態(tài)結(jié)構(gòu)的形成、