人常見(jiàn)皰疹病毒PCR-基因芯片技術(shù)快速診斷兒童皰疹性腦炎.pdf

1、病毒性腦炎是由病毒引起的一種腦膜和腦實(shí)質(zhì)的炎癥，是小兒較常見(jiàn)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)的感染性疾病，而皰疹病毒則是引起病毒性腦炎較主要的病因，其中具有代表性的是單純皰疹病毒1型和2型(HSV-1、HSV-2)、水痘一帶狀皰疹病毒(VZV)、人巨細(xì)胞病毒(CMV)、EB病毒(EBV)、人類(lèi)皰疹病毒6型(HHV-6A、HHV-6B)。皰疹性腦炎有著較高的發(fā)病率和死亡率，不及時(shí)治療易留下嚴(yán)重的神經(jīng)功能缺陷。而早期大劑量的抗病毒治療可使死亡率顯著降低，存活

2、率提高，因此皰疹性腦炎的療效評(píng)價(jià)關(guān)鍵在于早期診斷，而早期診斷和及時(shí)的治療需依賴(lài)實(shí)驗(yàn)室的診斷。在本研究中，以人皰疹病毒DNA多聚酶基因區(qū)為靶序列，設(shè)計(jì)多重引物和寡核苷酸探針，制成基因芯片，建立可同時(shí)檢測(cè)單純皰疹病毒1型和2型(HSV-1、HSV-2)、水痘一帶狀皰疹病毒(VZV)、愛(ài)潑斯坦一馬爾病毒(EBV)、人巨細(xì)胞病毒(CMV)和人類(lèi)皰疹病毒6型(HHV-6A、HHV-6B)等七種人皰疹病毒的多重PCR．基因芯片技術(shù)；對(duì)臨床疑似病毒性

3、腦炎的290-份腦脊液標(biāo)本進(jìn)行PCR-基因芯片雜交檢測(cè)，取得良好結(jié)果。 目的: 建立一種能同時(shí)快速檢測(cè)臨床常見(jiàn)人皰疹病毒的新技術(shù)，探討兒童皰疹性腦炎的快速診斷新方法。 方法: 在人皰疹病毒的DNA多聚酶基因區(qū)設(shè)計(jì)引物和寡核苷酸探針，同時(shí)擴(kuò)增單純皰疹病毒1型和2型(HSV-1、HSV-2)、水痘一帶狀皰疹病毒(VZV)、愛(ài)潑斯坦-馬爾病毒(EBV)、人巨細(xì)胞病毒(CMV)和人類(lèi)皰疹病毒6型(HHV-6A、H

4、HV-6B)等多種人皰疹病毒；建立七種人皰疹病毒的多重。PCR-基因芯片技術(shù)。對(duì)臨床疑似病毒性腦炎的290份腦脊液標(biāo)本進(jìn)行PCR-基因芯片雜交檢測(cè)，同時(shí)以臨床常規(guī)皰疹類(lèi)病毒系列熒光定量PCR試劑盒檢測(cè)結(jié)果作比較；并將陽(yáng)性標(biāo)本經(jīng)分子克隆后測(cè)序。選同期非病毒感染疾病住院的患兒30例腦脊液標(biāo)本作為對(duì)照組(癲癇18例，化膿性腦膜炎12例)。 結(jié)果: 人皰疹病毒PCR-基因芯片能檢測(cè)到10拷貝的上述皰疹類(lèi)病毒數(shù)；各皰疹類(lèi)病毒間的探

5、針信號(hào)不相互干擾，細(xì)菌、真菌、乙肝病毒及人基因組DNA等對(duì)照品無(wú)雜交信號(hào)。用該多重PCR．基因芯片技術(shù)對(duì)臨床疑似為病毒性腦炎的290份腦脊液標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，共檢出11份陽(yáng)性標(biāo)本，其中HSV-13例，HSV-22例，EBV 1例，CMV 1例，HHV-6A 2例，HHV-6B 1例，HSV-2和CMV混合感染1例，陽(yáng)性率為3.8％。與TaqMan熒光定量PCR法比較，其敏感度為91.7％，特異性為100％；并將11份陽(yáng)性標(biāo)本分子克隆后測(cè)序，

6、與基因庫(kù)中相應(yīng)病毒序列比較，其同源性大于98％。30例非病毒感染疾病住院的患兒腦脊液標(biāo)本7種人皰疹病毒的DNA檢測(cè)均陰性。并對(duì)11例陽(yáng)性標(biāo)本進(jìn)行病案檢索，其中2例為臨床確診的皰疹性腦炎，另外9例均為臨床病因不明的病毒性腦炎，PCR-基因芯片技術(shù)為其提供了明確的病原學(xué)診斷，并為開(kāi)始明確而有效的抗病毒治療提供了實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。 結(jié)論: 建立的人皰疹病毒多重PCR．基因芯片技術(shù)，可同時(shí)檢測(cè)7種人皰疹病毒，其檢測(cè)快速簡(jiǎn)便、特異性及敏