山羊傳染性胸膜肺炎病原分離及診斷方法研究.pdf

1、目的改進(jìn)山羊支原體培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分和培養(yǎng)條件，解決山羊支原體培養(yǎng)時(shí)間長、營養(yǎng)要求高和難于分離的問題；鑒定重慶地區(qū)山羊傳染性胸膜肺炎病原流行株的血清型，并針對(duì)這種血清型篩選出敏感藥物，用于臨床治療；建立臨床上簡(jiǎn)便、快速、特異、靈敏的檢測(cè)方法，為該病快速診斷和流行病學(xué)調(diào)查提供幫助。 方法結(jié)合本實(shí)驗(yàn)室的具體情況，參照支原體的營養(yǎng)需要和分離培養(yǎng)生長條件，對(duì)Hartleys培養(yǎng)基進(jìn)行適當(dāng)?shù)母牧?；支原體的分離鑒定按照Fredndt等介紹的經(jīng)

2、典方法進(jìn)行；藥敏試驗(yàn)按照戴自英的藥物紙片瓊脂擴(kuò)散法進(jìn)行；玻板凝集試驗(yàn)按照彭遠(yuǎn)義的方法進(jìn)行；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)按吳延功的方法進(jìn)行；微量間接血凝試驗(yàn)(MIHA)參照楊宜生等的方法進(jìn)行；PCR試驗(yàn)參照Marie-PierreMonnerati等的方法進(jìn)行；對(duì)5個(gè)發(fā)病羊場(chǎng)的51份可疑血清，用玻板凝集、ELISA和MIHA法檢測(cè)，分別檢驗(yàn)其陽性檢出率和與有典型臨床癥狀陽生病例的符合率。 結(jié)果山羊支原體標(biāo)準(zhǔn)菌株和分離株，在改良型

3、Hartleys液體培養(yǎng)基上，經(jīng)24～72h后，培養(yǎng)基顏色由紅色變成黃色，培養(yǎng)基顯著渾濁，顏色變化單位(CCU)達(dá)10-13及其以上；經(jīng)鑒定，本次分離到的山羊傳染性胸膜肺炎病原的血清型為絲狀支原體山羊亞種PG3株；玻板凝集試驗(yàn)所制診斷抗原經(jīng)嚴(yán)格檢驗(yàn)，無自凝現(xiàn)象，對(duì)可疑病例的陽性檢出率為56.86﹪，檢測(cè)結(jié)果與具有典型臨床癥狀病例的符合率為38.10﹪；25種抗生素體外抑菌試驗(yàn)表明：病原對(duì)環(huán)丙沙星、壯觀霉素等6種藥物高度敏感，對(duì)奧復(fù)星、頭

4、孢拉定等5種藥物中度敏感，對(duì)復(fù)方新諾明、慶大霉素等14種藥物不敏感；在MIHA試驗(yàn)中，用致敏豚鼠紅細(xì)胞代替綿羊紅細(xì)胞，對(duì)由絲狀支原體山羊亞種PG3株引起的山羊傳染性胸膜肺炎病進(jìn)行診斷，陽性檢出率為21.57﹪，檢測(cè)結(jié)果與具有典型臨床癥狀病例的符合率為72.73﹪；酶聯(lián)免疫試驗(yàn)的抗原最佳包被濃度為4.0mg/l，血清最佳稀釋倍數(shù)為1：40，最適包被時(shí)間為4℃過夜，封閉時(shí)間以37℃、2h效果最好，酶標(biāo)二抗以工作2h最理想，底物反應(yīng)時(shí)間以20

5、min為宜，該法對(duì)可疑病例的陽性檢出率為19.61﹪，檢測(cè)結(jié)果與具有典型臨床癥狀病例的符合率為80﹪；用Marie-PierreMonnerati等設(shè)計(jì)的一對(duì)引物，成功擴(kuò)增出了分離株LppA基因中1049bp的特異性序列。 結(jié)論成功改良了用于山羊傳染性胸膜肺炎支原體培養(yǎng)的Hartleys培養(yǎng)基，縮短了支原體培養(yǎng)時(shí)間。用這種改良培養(yǎng)基，從重慶地區(qū)的發(fā)病山羊群中，成功地分離出山羊傳染性胸膜肺炎的病原：分離株對(duì)環(huán)丙沙星、壯觀霉素等6種

6、藥物高敏；所制玻板凝集試驗(yàn)診斷抗原、建立的用致敏豚鼠紅細(xì)胞代替綿羊紅細(xì)胞微量間接血凝試驗(yàn)和建立的酶聯(lián)免疫試驗(yàn)(ELISA)，對(duì)51例山羊傳染性胸膜肺炎可疑病例的陽性檢出率分別為：56.86﹪、21.57﹪和19.61﹪，三種診斷方法與具有山羊傳染性胸膜肺炎典型臨床癥狀病例的符合率分別為：38.10﹪、72.73﹪和80﹪；用Marie-PierreMonnerati等設(shè)計(jì)的1對(duì)引物，成功擴(kuò)增出分離株LppA基因中1049bp的特異性序列