淡色庫蚊抗藥性相關(guān)新基因——NYD-MLC2克隆、序列分析及表達(dá)載體構(gòu)建.pdf

1、[目的]鑒定淡色庫蚊溴氰菊酯抗性和敏感品系中肌球蛋白輕鏈2基因(NYD-MLC2)的表達(dá)差異，獲取NYD-MCL2cDNA全長(zhǎng)序列，并構(gòu)建NYD-MLC2原核和昆蟲表達(dá)載體，為進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)。 [方法]用熒光定量PCR法鑒定NYD-MLC2在淡色庫蚊溴氰菊酯抗性和敏感品系中的表達(dá)差異。用RACE法從抗性品系中擴(kuò)增NYD-MLC2cDNA全長(zhǎng)序列，對(duì)NYD-MLC2編碼的蛋白進(jìn)行生物信息學(xué)分析。用Blast軟件在NCBI和Sw

2、issProt數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行同源性比對(duì)，用Clustalw軟件進(jìn)行聚類分析，用EMBLpI/Mwtool計(jì)算等電點(diǎn)和分子量，Prot-Param分析NYD-MLC2基因編碼的蛋白質(zhì)的基本性質(zhì)，Signal3.0軟件進(jìn)行信號(hào)肽分析，ProtScale軟件進(jìn)行疏水性分析，PSORTⅡ軟件進(jìn)行細(xì)胞定位分析，PatSearch軟件進(jìn)行基序分析，SMART軟件進(jìn)行蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域分析，HNN軟件分析二級(jí)結(jié)構(gòu)，Tmpred軟件進(jìn)行跨膜區(qū)預(yù)測(cè)等。通過基因重

3、組方法構(gòu)建NYD-MLC2原核和昆蟲表達(dá)載體。 [結(jié)果]熒光定量PCR結(jié)果顯示，NYD-MLC2在淡色庫蚊溴氰菊酯抗性品系中的表達(dá)量是敏感品系的4.08倍。獲得淡色庫蚊NYD-MLC2cDNA全長(zhǎng)序列，其中完整開讀框序列為630bp，經(jīng)推導(dǎo)編碼210個(gè)氨基酸(GenBank/NCBIDQ140391，2005)，與多個(gè)物種的肌球蛋白輕鏈2基因比對(duì)，同源性大于25﹪。成功構(gòu)建NYD-MLC2原核和昆蟲表達(dá)載體。 [結(jié)論]N