淡色庫蚊EU073017基因的克隆和初步功能鑒定.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、【目的】克隆淡色庫蚊EU073017基因，研究其與蚊抗藥性關(guān)系。 【方法】根據(jù)本試驗(yàn)室抑制性差減雜交(suppression subtractive hybridization，SSH)結(jié)合cDNA芯片篩選獲得的EST片段(GenBankno.BE 247823)，設(shè)計(jì)引物，從淡色庫蚊溴氰菊酯抗性品系cDNA文庫中分別擴(kuò)增出目的基因的5’和3’末端，T/A克隆于pGT載體，轉(zhuǎn)化、測序、對(duì)位拼接獲取基因序列。生物信息學(xué)軟件分析EU

2、073017基因編碼的氨基酸序列。實(shí)時(shí)熒光定量PCR驗(yàn)證EU073017基因在淡色庫蚊溴氰菊酯抗性品系和敏感品系(4齡幼蟲期)的表達(dá)差異。應(yīng)用基因重組方法構(gòu)建EU073017基因的昆蟲表達(dá)載體，并轉(zhuǎn)染入白紋伊蚊C6/36細(xì)胞，經(jīng)藥物篩選獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染單克隆細(xì)胞系；RT-PCR鑒定目的基因在轉(zhuǎn)染細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄水平。Cell Counting Kit-8(CCK-8)試劑盒檢測轉(zhuǎn)染細(xì)胞系對(duì)溴氰菊酯的敏感性變化。 【結(jié)論】本研究克隆了淡色庫

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