人DNAJC25基因的克隆、鑒定及其初步功能探討.pdf

1、肝細胞癌(Hepatocellular Carcinoma，HCC)（簡稱肝癌）是世界上最常見、惡性程度最高的腫瘤之一，位居全球惡性腫瘤發(fā)病率的第5位、死因的第3位，每年新增病例超過60萬。近幾十年以來，盡管部分肝癌病人因為早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷及綜合治療而獲得長期生存，但總體而言，肝癌的預(yù)后并沒有得到顯著的改善，5年生存率仍僅有3％-5％左右。手術(shù)仍是目前治療肝癌最有效的方法，但術(shù)后轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)已成為阻礙肝癌病人長期生存的主要障礙。因此，一些

2、與肝癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的基因或蛋白還有待研究，以便開發(fā)更加完善的早期識別和綜合治療方案，從而提高肝癌治療效果、延長病人生存時間。
　　熱休克蛋白(heat shock proteins，HSPs)是一組普遍存在與原核生物和真核生物中的，在應(yīng)激狀態(tài)下表達顯著增高的蛋白。因其首次在熱應(yīng)激條件下發(fā)現(xiàn)而被命名。隨后，人們發(fā)現(xiàn)除熱應(yīng)激外的其他一些應(yīng)激原，如缺氧、重金屬中毒、氧化應(yīng)激、感染、饑餓、創(chuàng)傷、代謝毒物等，也能激活HSP基因，誘導(dǎo)合

3、成熱休克蛋白。隨著研究的深入，科學(xué)家還發(fā)現(xiàn)，甚至在非應(yīng)激條件下，熱休克蛋白在生物細胞中也存在表達。這種現(xiàn)象廣泛存在于從高等哺乳動物到鳥類、昆蟲、大腸桿菌等各種生物中。
　　HSP對于維持細胞的正常生理狀態(tài)和新陳代謝有著十分重要的作用。其最主要的功能就是作為分子伴侶促進蛋白質(zhì)的正確折疊、組裝，幫助錯誤折疊的蛋白質(zhì)重新折疊或降解，并與未被糾正的錯誤折疊的肽鏈結(jié)合，使其保留在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)并被蛋白酶水解。在應(yīng)激狀態(tài)下，HSPs能通過預(yù)防非天然

4、構(gòu)象的蛋白質(zhì)凝集和防止核仁碎裂從而增強細胞的耐受性，使細胞在受到各種外界刺激的情況下仍能維持自身的穩(wěn)態(tài)。此外，HSPs還參與了細胞骨架動力學(xué)、細胞形態(tài)和機動性的調(diào)控。不僅如此，HSPs還參與了各種生理活動。HSPs通過參與抗原加工、呈遞;參與淋巴細胞歸巢;參與感染免疫和自身免疫以及同種移植排斥免疫等一系列免疫過程而起到協(xié)同免疫的作用。HSPs還與細胞凋亡關(guān)系密切，對于高溫、電離輻射等應(yīng)急引起的細胞凋亡具有保護作用。
　　同時，HS

5、Ps也與一系列的疾病有著緊密的聯(lián)系。已有研究報道，HSPs在腫瘤的發(fā)生發(fā)展、免疫系統(tǒng)疾病、心血管疾病、神經(jīng)變形構(gòu)象病、支氣管哮喘等疾病中均起到重要作用。其中又以與免疫系統(tǒng)疾病和腫瘤的發(fā)生關(guān)系最為密切也最受到關(guān)注。其中HSP90、HSP70和HSP27等家族成員在腫瘤組織中呈明顯高表達，HSP70和HSP90還能與突變型的p53形成穩(wěn)定復(fù)合物，并導(dǎo)致突變的p53在胞漿聚集，促進腫瘤的增殖、腫瘤血管的生長、侵襲以及轉(zhuǎn)移。越來越多的HSP蛋白

6、已被證實為腫瘤發(fā)生的生物記號，并成為抗腫瘤的靶點。
　　在此次研究中，我們克隆并且鑒定了HSP家族的一個新成員，DnaJ(Hsp40)homolog，subfamily C，member25，又名DNAJC25,利用免疫熒光實驗我們揭示了其在細胞內(nèi)定位于細胞質(zhì)中;利用半定量PCR技術(shù)，我們檢測了其在15種人體組織中的相對表達量，發(fā)現(xiàn)其在肝臟組織中的表達水平明顯高于其他組織;并利用實時熒光定量PCR(realtime-PCR)的方法