人DNAJC25基因的克隆、鑒定及其初步功能探討.pdf

1、肝細(xì)胞癌(Hepatocellular Carcinoma，HCC)（簡(jiǎn)稱肝癌）是世界上最常見(jiàn)、惡性程度最高的腫瘤之一，位居全球惡性腫瘤發(fā)病率的第5位、死因的第3位，每年新增病例超過(guò)60萬(wàn)。近幾十年以來(lái)，盡管部分肝癌病人因?yàn)樵缙诎l(fā)現(xiàn)、早期診斷及綜合治療而獲得長(zhǎng)期生存，但總體而言，肝癌的預(yù)后并沒(méi)有得到顯著的改善，5年生存率仍僅有3％-5％左右。手術(shù)仍是目前治療肝癌最有效的方法，但術(shù)后轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)已成為阻礙肝癌病人長(zhǎng)期生存的主要障礙。因此，一些

2、與肝癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的基因或蛋白還有待研究，以便開(kāi)發(fā)更加完善的早期識(shí)別和綜合治療方案，從而提高肝癌治療效果、延長(zhǎng)病人生存時(shí)間。
　　熱休克蛋白(heat shock proteins，HSPs)是一組普遍存在與原核生物和真核生物中的，在應(yīng)激狀態(tài)下表達(dá)顯著增高的蛋白。因其首次在熱應(yīng)激條件下發(fā)現(xiàn)而被命名。隨后，人們發(fā)現(xiàn)除熱應(yīng)激外的其他一些應(yīng)激原，如缺氧、重金屬中毒、氧化應(yīng)激、感染、饑餓、創(chuàng)傷、代謝毒物等，也能激活HSP基因，誘導(dǎo)合

3、成熱休克蛋白。隨著研究的深入，科學(xué)家還發(fā)現(xiàn)，甚至在非應(yīng)激條件下，熱休克蛋白在生物細(xì)胞中也存在表達(dá)。這種現(xiàn)象廣泛存在于從高等哺乳動(dòng)物到鳥(niǎo)類、昆蟲(chóng)、大腸桿菌等各種生物中。
　　HSP對(duì)于維持細(xì)胞的正常生理狀態(tài)和新陳代謝有著十分重要的作用。其最主要的功能就是作為分子伴侶促進(jìn)蛋白質(zhì)的正確折疊、組裝，幫助錯(cuò)誤折疊的蛋白質(zhì)重新折疊或降解，并與未被糾正的錯(cuò)誤折疊的肽鏈結(jié)合，使其保留在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)并被蛋白酶水解。在應(yīng)激狀態(tài)下，HSPs能通過(guò)預(yù)防非天然

4、構(gòu)象的蛋白質(zhì)凝集和防止核仁碎裂從而增強(qiáng)細(xì)胞的耐受性，使細(xì)胞在受到各種外界刺激的情況下仍能維持自身的穩(wěn)態(tài)。此外，HSPs還參與了細(xì)胞骨架動(dòng)力學(xué)、細(xì)胞形態(tài)和機(jī)動(dòng)性的調(diào)控。不僅如此，HSPs還參與了各種生理活動(dòng)。HSPs通過(guò)參與抗原加工、呈遞;參與淋巴細(xì)胞歸巢;參與感染免疫和自身免疫以及同種移植排斥免疫等一系列免疫過(guò)程而起到協(xié)同免疫的作用。HSPs還與細(xì)胞凋亡關(guān)系密切，對(duì)于高溫、電離輻射等應(yīng)急引起的細(xì)胞凋亡具有保護(hù)作用。
　　同時(shí)，HS

5、Ps也與一系列的疾病有著緊密的聯(lián)系。已有研究報(bào)道，HSPs在腫瘤的發(fā)生發(fā)展、免疫系統(tǒng)疾病、心血管疾病、神經(jīng)變形構(gòu)象病、支氣管哮喘等疾病中均起到重要作用。其中又以與免疫系統(tǒng)疾病和腫瘤的發(fā)生關(guān)系最為密切也最受到關(guān)注。其中HSP90、HSP70和HSP27等家族成員在腫瘤組織中呈明顯高表達(dá)，HSP70和HSP90還能與突變型的p53形成穩(wěn)定復(fù)合物，并導(dǎo)致突變的p53在胞漿聚集，促進(jìn)腫瘤的增殖、腫瘤血管的生長(zhǎng)、侵襲以及轉(zhuǎn)移。越來(lái)越多的HSP蛋白

6、已被證實(shí)為腫瘤發(fā)生的生物記號(hào)，并成為抗腫瘤的靶點(diǎn)。
　　在此次研究中，我們克隆并且鑒定了HSP家族的一個(gè)新成員，DnaJ(Hsp40)homolog，subfamily C，member25，又名DNAJC25,利用免疫熒光實(shí)驗(yàn)我們揭示了其在細(xì)胞內(nèi)定位于細(xì)胞質(zhì)中;利用半定量PCR技術(shù)，我們檢測(cè)了其在15種人體組織中的相對(duì)表達(dá)量，發(fā)現(xiàn)其在肝臟組織中的表達(dá)水平明顯高于其他組織;并利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(realtime-PCR)的方法