RNA干擾抑制宮頸癌Hela細(xì)胞株HPV18 E6、E7的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、中國(guó)醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文RNA干擾抑制宮頸癌Hela細(xì)胞株HPV18E6、E7的實(shí)驗(yàn)研究姓名：王雪蓮申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：病原生物學(xué)指導(dǎo)教師：安春麗20070401中文論著摘要RNA干擾抑制宮頸癌Hela細(xì)胞株HPVl8E6、E7的實(shí)驗(yàn)研究目的宮頸癌是女性最常見的生殖道惡性腫瘤，其病死率居女性癌癥病死率的第二位，是嚴(yán)重威脅婦女健康的主要疾病之一。研究證實(shí)，高危型人乳頭瘤病毒(humanpapillomavirus，HPⅥ是導(dǎo)致富頸癌的

2、主要原因。幾乎所有的宮頸癌組織含有IIPV，其中，HPV16、HPV18是最常見的型別。HPVl8高表達(dá)的宮頸癌具有浸潤(rùn)性強(qiáng)、從宮頸非典型增生到浸潤(rùn)癌進(jìn)展快、淋巴轉(zhuǎn)移率高、復(fù)發(fā)率高等特點(diǎn)，而目前臨床采用的治療方法，如手術(shù)、放療和化療等方法創(chuàng)傷大，副反應(yīng)重，而且可能剝奪年輕患者的生育功能。隨著宮頸癌發(fā)病的年輕化和患者對(duì)治療后生活質(zhì)量要求的提高，尋求一種新的微創(chuàng)、副反應(yīng)小、可以根治腫瘤的方法勢(shì)在必行。Hela細(xì)胞為人宮頸腺癌細(xì)胞株，細(xì)胞內(nèi)有

3、HPVl8基因組。研究證實(shí)，高危型HPVl8基因組中E6、E7基因是惡性轉(zhuǎn)化基因，具有細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能，其編碼的E6、E7蛋白同時(shí)表達(dá)是惡性轉(zhuǎn)化、惡性表型維持的關(guān)鍵。高危型HPVE6、E7與細(xì)胞周期調(diào)節(jié)因子P53、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白(RetinoblastomaproteinpRB)相互作用，直接干預(yù)細(xì)胞周期進(jìn)程，在HPV誘導(dǎo)腫瘤形成過(guò)程中發(fā)揮至關(guān)重要的作用。因而HPVE6、E7成為IIPV陽(yáng)性宮頸癌基因治療的理想靶標(biāo)。RNAi作為一種新的

4、用于基因功能和基因治療研究的工具，具有特異性高、穩(wěn)定性好，抑制作用強(qiáng)、細(xì)胞攝取容易等優(yōu)點(diǎn)，已被廣泛用于病毒的基因功能及病毒相關(guān)疾病的基因治療研究，并取得了令人欣喜的效果。但有關(guān)RNAi抑制HPVl8及細(xì)胞內(nèi)HPVl8惡性轉(zhuǎn)化基因E6抑制后細(xì)胞周期調(diào)控因子變化的研究較少。本研究以HPVl8E6為靶標(biāo)，利用RNAi技術(shù)進(jìn)行以下研究：①針對(duì)高度保守的、具有惡性轉(zhuǎn)化作用的HPVl8E6基因設(shè)計(jì)同源小干擾RNA(smallinterference