RNA結(jié)合蛋白Sam68 mRNA在原發(fā)性肝癌中的表達.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文RNA結(jié)合蛋白Sam68mRNA在原發(fā)性肝癌中的表達姓名:馬高祥申請學(xué)位級別:碩士專業(yè):外科學(xué)(普外)指導(dǎo)教師:吳育連20050301馬高祥2005ff浙rr螳碳十研究生學(xué)位論文MaGaoXiangDissertationfarMM性肝癌中的表達情況國內(nèi)外尚無正式報道。本研究通過半定量RTPCR技術(shù),首次明確了RNA結(jié)合蛋白Sam68mRNA在人原發(fā)性肝癌中的表達情況,為進一步研究STAR蛋白在腫瘤形成和發(fā)展過程中的

2、作用機制提供了一定的理論基礎(chǔ)。材料和方法選取20例原發(fā)性肝癌的腫瘤組織及相應(yīng)癌旁組織。采用TRIzol~步法提取總RNA并進行質(zhì)量檢測。參照國外文獻設(shè)計Sam68及9actin引物各一對,PCR擴增產(chǎn)物片段分別為Sarn68530bp,Bactin300bp。取各樣本組RNA行常規(guī)RTPCR擴增,RT參數(shù)設(shè)置按照說明書,PCR參數(shù)設(shè)置如下:94℃預(yù)變性5min;94℃變性30s,55℃退火45s,70℃延伸1min,Sam68和B—ac

3、tin分管擴增,均為35循環(huán);再72℃最終延伸10rain,PCR產(chǎn)物4℃保存并測序。取10“l(fā)PCR擴增產(chǎn)物,以】8%瓊脂糖凝膠電泳,圖像掃描保存,用BandLeader(Ver300)電泳圖像分析軟件,對電泳條帶的光密度進行分析,以CAR/B,actin的光密度比值作為相對定量,表示Sam68mRNA的表達強度。每個樣本重復(fù)3次PER,取Sam68/B。actin的光密度比值的均值為統(tǒng)計數(shù)據(jù)。以SPSSll5統(tǒng)計學(xué)軟件進行分析,采用

4、配對資料f檢驗。結(jié)果對總RNA用紫外分光光度計進行檢測,A260/A28018,證明提取的總RNA純度較高,無蛋白質(zhì)污染。經(jīng)DNA測序,PCR產(chǎn)物序列與Sam68基因序列完全吻合,證實為Sam68基因擴增產(chǎn)物。PCR產(chǎn)物電泳顯示,本組20例,除2例呈陰性外。其余18例肝癌及相應(yīng)癌旁組織均檢出Sam68mRNA表達。其中,肝癌組織中Sam68mRNA平均表達強度為6071%926%,相應(yīng)癌旁組織中Sam68mRNA平均表達強度為7698%

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