版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
肺結(jié)核是嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題。其傳播范圍廣、早期無(wú)癥狀、無(wú)有效疫苗等特點(diǎn)決定了對(duì)此病最有效的預(yù)防干預(yù)措施是及時(shí)發(fā)現(xiàn)并治療患者。長(zhǎng)期以來(lái),結(jié)核菌的檢測(cè)技術(shù)沒(méi)有顯著的進(jìn)步,傳統(tǒng)的涂片抗酸染色鏡檢法和聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)仍是目前最常用檢測(cè)方法,兩種方法都存在缺陷,前者敏感性低、后者易出現(xiàn)假陰性和假陽(yáng)性都是長(zhǎng)期困擾防癆工作者問(wèn)題,傳統(tǒng)方法已不能滿足當(dāng)前結(jié)核病防治工作的需要。免疫磁珠分離技術(shù)(IMS)是一種有效的分離手段,在
2、免疫檢測(cè)、細(xì)胞及微生物分離、大分子物質(zhì)純化等領(lǐng)域得到越來(lái)越廣泛的應(yīng)用。本次研究旨在建立起免疫磁珠從痰液中分離結(jié)核桿菌的方法,并探討其與傳統(tǒng)的結(jié)核桿菌檢測(cè)方法,包括涂片抗酸染色鏡檢和常規(guī)PCR檢測(cè),聯(lián)合應(yīng)用時(shí)對(duì)肺結(jié)核的診斷價(jià)值。
方法:
將人型結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株H37Rv的純培養(yǎng)物超聲破碎制各菌體粗抗原,免疫新西蘭大白兔獲得多克隆抗血清,純化血清IgG,經(jīng)分析后直接包被于活化磁珠表面,并確定抗體包被磁珠的最適
3、濃度、最佳包被時(shí)間。通過(guò)探索合適的痰液處理方法、免疫磁珠分離痰樣的最佳pH值和最佳分離時(shí)間,建立起免疫磁珠從痰液中分離結(jié)核分枝桿菌方法。
利用建立的免疫磁珠分離技術(shù)分離臨床痰樣品中的結(jié)核桿菌后,再進(jìn)行涂片染色鏡檢和PCR檢測(cè),通過(guò)比較免疫磁珠分離前后涂片和PCR法的檢出率、靈敏度、特異度等指標(biāo),評(píng)價(jià)新建檢測(cè)方法的應(yīng)用價(jià)值。
結(jié)果:
本次研究制備的多克隆抗體效價(jià)為1:16000,SDS-PAGE電
4、泳結(jié)果顯示其純化后具有良好的電泳純度,抗血清中IgG濃度為1.05μg/μl。偶聯(lián)時(shí)抗體與磁珠的最適比例為0.64μg/107個(gè)磁珠,包被時(shí)間以18h為佳,檢測(cè)下限為103個(gè)菌/ml。通過(guò)試驗(yàn),每毫升處理過(guò)的樣品中加入磁珠的數(shù)目不少于2x107,磁珠與處理后的樣品反應(yīng)30min左右可達(dá)到較好的分離效果。
對(duì)痰內(nèi)結(jié)核桿菌進(jìn)行直接涂片、PCR檢測(cè)及磁珠分離后再對(duì)分離物進(jìn)行涂片、PCR檢測(cè),檢出率分別為14.36%、18.78%
5、、37.02%及50.83%。以培養(yǎng)法作為參考標(biāo)準(zhǔn),直接涂片與磁珠分離后涂片法的靈敏度分別為36.92%和52.31%,后者較前者提高15.39%。以綜合診斷指標(biāo)做為參考標(biāo)準(zhǔn),磁珠分離后涂片較直接涂片法靈敏度提高6.15%,磁珠分離后PCR較直接PCR檢測(cè)的靈敏度提高20.77%。
結(jié)論:
本研究使用自制抗體包被的免疫磁珠,能有效分離出痰內(nèi)的結(jié)核分枝桿菌;免疫磁珠分離技術(shù)與涂片法、PCR法聯(lián)合使用,可提高后兩
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 噬菌體生物擴(kuò)增法檢測(cè)痰結(jié)核分枝桿菌與其他檢測(cè)方法的比較.pdf
- 乳及乳制品中結(jié)核分枝桿菌檢測(cè)方法-熒光定量PCR法.pdf
- 結(jié)核分枝桿菌多重耐藥基因快速檢測(cè)方法學(xué)的研究.pdf
- 結(jié)核分枝桿菌快速檢測(cè)方法的研究.pdf
- 痰標(biāo)本結(jié)核分枝桿菌檢測(cè)及katG基因的研究.pdf
- 恥垢分枝桿菌與結(jié)核分枝桿菌抗原的交叉免疫反應(yīng)研究.pdf
- 利用熒光定量RT-PCR和PCR方法檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群.pdf
- 2010年外文翻譯-分枝桿菌基因型直接檢測(cè)痰標(biāo)本對(duì)檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌復(fù)合體的評(píng)價(jià)
- [雙語(yǔ)翻譯]外文翻譯-分枝桿菌基因型直接檢測(cè)痰標(biāo)本對(duì)檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌復(fù)合體的評(píng)價(jià)
- 2010年外文翻譯-分枝桿菌基因型直接檢測(cè)痰標(biāo)本對(duì)檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌復(fù)合體的評(píng)價(jià)(原文).pdf
- [雙語(yǔ)翻譯]外文翻譯-分枝桿菌基因型直接檢測(cè)痰標(biāo)本對(duì)檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌復(fù)合體的評(píng)價(jià)(譯文)
- 結(jié)核分枝桿菌
- [雙語(yǔ)翻譯]外文翻譯-分枝桿菌基因型直接檢測(cè)痰標(biāo)本對(duì)檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌復(fù)合體的評(píng)價(jià)(原文)
- 檢測(cè)4種手部非結(jié)核分枝桿菌感染的多重PCR方法的建立.pdf
- 2010年外文翻譯-分枝桿菌基因型直接檢測(cè)痰標(biāo)本對(duì)檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌復(fù)合體的評(píng)價(jià)(譯文).doc
- 肺分枝桿菌感染臨床特征、耐藥模式、預(yù)后研究及肺組織結(jié)核分枝桿菌巢式PCR檢測(cè).pdf
- snt 2101-2008 乳及乳制品中結(jié)核分枝桿菌檢測(cè)方法 熒光定量pcr法
- PCR-SSCP檢測(cè)巨噬細(xì)胞內(nèi)結(jié)核分枝桿菌耐藥性的探討.pdf
- 納米金標(biāo)記銀染增強(qiáng)法快速檢測(cè)痰標(biāo)本中結(jié)核分枝桿菌.pdf
- 兒童結(jié)核分枝桿菌潛伏感染檢測(cè)方法的比較.pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論