2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的:
   肺結(jié)核是嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題。其傳播范圍廣、早期無(wú)癥狀、無(wú)有效疫苗等特點(diǎn)決定了對(duì)此病最有效的預(yù)防干預(yù)措施是及時(shí)發(fā)現(xiàn)并治療患者。長(zhǎng)期以來(lái),結(jié)核菌的檢測(cè)技術(shù)沒(méi)有顯著的進(jìn)步,傳統(tǒng)的涂片抗酸染色鏡檢法和聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)仍是目前最常用檢測(cè)方法,兩種方法都存在缺陷,前者敏感性低、后者易出現(xiàn)假陰性和假陽(yáng)性都是長(zhǎng)期困擾防癆工作者問(wèn)題,傳統(tǒng)方法已不能滿足當(dāng)前結(jié)核病防治工作的需要。免疫磁珠分離技術(shù)(IMS)是一種有效的分離手段,在

2、免疫檢測(cè)、細(xì)胞及微生物分離、大分子物質(zhì)純化等領(lǐng)域得到越來(lái)越廣泛的應(yīng)用。本次研究旨在建立起免疫磁珠從痰液中分離結(jié)核桿菌的方法,并探討其與傳統(tǒng)的結(jié)核桿菌檢測(cè)方法,包括涂片抗酸染色鏡檢和常規(guī)PCR檢測(cè),聯(lián)合應(yīng)用時(shí)對(duì)肺結(jié)核的診斷價(jià)值。
   方法:
   將人型結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株H37Rv的純培養(yǎng)物超聲破碎制各菌體粗抗原,免疫新西蘭大白兔獲得多克隆抗血清,純化血清IgG,經(jīng)分析后直接包被于活化磁珠表面,并確定抗體包被磁珠的最適

3、濃度、最佳包被時(shí)間。通過(guò)探索合適的痰液處理方法、免疫磁珠分離痰樣的最佳pH值和最佳分離時(shí)間,建立起免疫磁珠從痰液中分離結(jié)核分枝桿菌方法。
   利用建立的免疫磁珠分離技術(shù)分離臨床痰樣品中的結(jié)核桿菌后,再進(jìn)行涂片染色鏡檢和PCR檢測(cè),通過(guò)比較免疫磁珠分離前后涂片和PCR法的檢出率、靈敏度、特異度等指標(biāo),評(píng)價(jià)新建檢測(cè)方法的應(yīng)用價(jià)值。
   結(jié)果:
   本次研究制備的多克隆抗體效價(jià)為1:16000,SDS-PAGE電

4、泳結(jié)果顯示其純化后具有良好的電泳純度,抗血清中IgG濃度為1.05μg/μl。偶聯(lián)時(shí)抗體與磁珠的最適比例為0.64μg/107個(gè)磁珠,包被時(shí)間以18h為佳,檢測(cè)下限為103個(gè)菌/ml。通過(guò)試驗(yàn),每毫升處理過(guò)的樣品中加入磁珠的數(shù)目不少于2x107,磁珠與處理后的樣品反應(yīng)30min左右可達(dá)到較好的分離效果。
   對(duì)痰內(nèi)結(jié)核桿菌進(jìn)行直接涂片、PCR檢測(cè)及磁珠分離后再對(duì)分離物進(jìn)行涂片、PCR檢測(cè),檢出率分別為14.36%、18.78%

5、、37.02%及50.83%。以培養(yǎng)法作為參考標(biāo)準(zhǔn),直接涂片與磁珠分離后涂片法的靈敏度分別為36.92%和52.31%,后者較前者提高15.39%。以綜合診斷指標(biāo)做為參考標(biāo)準(zhǔn),磁珠分離后涂片較直接涂片法靈敏度提高6.15%,磁珠分離后PCR較直接PCR檢測(cè)的靈敏度提高20.77%。
   結(jié)論:
   本研究使用自制抗體包被的免疫磁珠,能有效分離出痰內(nèi)的結(jié)核分枝桿菌;免疫磁珠分離技術(shù)與涂片法、PCR法聯(lián)合使用,可提高后兩

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