大腸癌發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移相關(guān)分子的篩選和生物學(xué)功能研究.pdf

1、本課題旨在通過差異蛋白質(zhì)組學(xué)的方法，尋找與大腸癌發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移相關(guān)的蛋白質(zhì)分子，研究這些蛋白質(zhì)與大腸癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。近期的研究表明，腫瘤的進(jìn)展和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移程度都是決定患者預(yù)后的重要因素。尋找與大腸癌發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移相關(guān)的分子，對(duì)于揭示大腸癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)理，以及預(yù)測(cè)患者的預(yù)后都具有非常重要的意義。
　　 本課題收集了15例臨床組織標(biāo)本，通過雙向電泳技術(shù)對(duì)組織總蛋白進(jìn)行分離分析，并對(duì)差異表達(dá)蛋白點(diǎn)進(jìn)行MALDI-TOF-MS分析

2、，得到了33個(gè)相關(guān)分子。其中FHC的表達(dá)水平隨腫瘤轉(zhuǎn)移的發(fā)生進(jìn)展而下降，而UCHL1的表達(dá)水平則隨轉(zhuǎn)移的發(fā)生進(jìn)展而上升。隨后，我們通過Western blot和免疫組化的方法對(duì)這一結(jié)果進(jìn)行了研究。
　　 免疫組化的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，UCHL1高表達(dá)與腫瘤T分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有顯著相關(guān)性。UCHLl是泛素水解酶家族的重要成員，它參與調(diào)控細(xì)胞內(nèi)很多重要代謝活動(dòng)。我們的研究發(fā)現(xiàn)，UCHL1高表達(dá)能夠促進(jìn)HCT8細(xì)胞在體外的增殖和遷移能力。

3、而其突變體C90S則失去了這種能力，這實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明，UCHL1的泛素水解酶功能對(duì)于其促進(jìn)生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移的功能是必不可少的。我們的研究還發(fā)現(xiàn)，LICHL1可能是通過激活β-catenin/TCF4通路來發(fā)揮其功能的。免疫熒光實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示，在UCHL1高表達(dá)的細(xì)胞中，β-catenin的表達(dá)量也有所提高，兩者存在共定位現(xiàn)象，并且主要定位于細(xì)胞核。另外，UCHL1的高表達(dá)能夠使β-catenin的蛋白量呈現(xiàn)高水平，而mRNA的表達(dá)量卻基本不變。

4、同時(shí)，UCHL1能夠促進(jìn)β-catenin/TCF4通路下游調(diào)控基因的表達(dá)。這說明，UCHL1可能是通過降低β-catenin的泛素化水平，使其在核內(nèi)堆積，從而激活β-catenin/TCF4通路來發(fā)揮功能的。
　　 另外，免疫組化結(jié)果顯示，F(xiàn)HC在大腸癌組織中的表達(dá)量有所下降，且其表達(dá)下降與腫瘤的轉(zhuǎn)移具有明顯的相關(guān)性。FHC在鐵代謝途徑中發(fā)揮重要的作用，具有貯存和釋放鐵離子的功能。我們初步研究了FHC的生物學(xué)功能，發(fā)現(xiàn)FHC高