亞洲Ⅰ型口蹄疫病毒中抗原表位篩選及其免疫功能的研究.pdf

1、口蹄疫病毒衣殼蛋白中的抗原表位是構(gòu)建高免疫原性亞單位基因工程疫苗的基礎。但是亞洲Ⅰ型口蹄疫病毒衣殼蛋白中抗原表位至今了解甚少。為此，以YNBS/58毒株為基礎，篩選VP1、VP2、VP3、VP4蛋白中可能含有的抗原表位。根據(jù)GenBank中查得亞洲Ⅰ型口蹄疫病毒YNBS/1958毒株VP2、VP3、VP4基因序列，VP1依據(jù)本實驗室測定的序列。采用PCR方法將外殼蛋白基因序列擴增成30個片段。每個片段長約87-126bp，各片段之間重疊

2、約30bp左右。將不同片段克隆到pWR590質(zhì)粒的β半乳糖苷酶基因3’端，構(gòu)建原核表達質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化大腸桿菌，表達融合蛋白。采用western blotting方法檢測篩選，發(fā)現(xiàn)含有有4個抗原表位肽段，分別為：VP1蛋白中133-163位氨基酸，VP2蛋白中1-33位氨基酸，VP3蛋白中1-34位氨基酸，VP4蛋白中1-35位氨基酸。 將篩選到的Asial型FMDV衣殼蛋白四個含有抗原表位融合蛋白分別免疫豚鼠，均能引起豚鼠T細胞應答

3、，說明這四個含有抗原表位肽段具有T細胞刺激功能，但只有VP1中133-163位氨基酸能夠誘導中和抗體產(chǎn)生。把上章所述VP2(1-33)，VP3(1-34)，VP4(1-35)融合蛋白各種組合與VP1(133-163)混合后免疫豚鼠，發(fā)現(xiàn)VP2(1-33)能夠刺激豚鼠針對VP1(133-163)中和抗體應答，中和抗體效價提高3-5倍；VP3(1-34)或VP4(1-35)融合蛋白單獨與VP1(133-163)混合免疫豚鼠不影響中和抗體效價