我國(guó)部分地區(qū)雞貧血病毒分子流行病學(xué)研究.pdf

1、雞貧血病毒(Chicken anemia vinJS,CAV)廣泛存在于世界各地，可引起雛雞發(fā)生嚴(yán)重的貧血、出血和免疫抑制，導(dǎo)致死亡率增加、易于發(fā)生繼發(fā)感染、對(duì)疫苗的免疫應(yīng)答反應(yīng)降低。本研究分離鑒定了1個(gè)烏骨雞源和2個(gè)雞源CAV毒株，測(cè)定了3個(gè)CAV分離株和12個(gè)組織病料樣品中CAV毒株的全基因組序列，進(jìn)行了我國(guó)CAV流行毒株的分子流行病學(xué)分析，并提出了雞傳染性貧血(Chicken infectious anemia，CIA)的防制對(duì)策

2、。 用5日齡SPF雞胚對(duì)3個(gè)CAV陽(yáng)性樣品進(jìn)行了分離，并采用間接免疫熒光試驗(yàn)、MSBl細(xì)胞培養(yǎng)、1日齡SPF雛雞回歸試驗(yàn)、間接ELISA和PCR等方法進(jìn)行了病毒鑒定。測(cè)定的烏骨雞源CAV分離株的全基因組序列與Cux-1等9個(gè)毒株之間核苷酸序列的相似性介于96.78％～98.87％之間。2個(gè)雞源CAV分離株以及12個(gè)直接來(lái)源于臨床樣品的CAV毒株全基因組序列測(cè)定結(jié)果表明，14個(gè)CAV毒株的全基因組結(jié)構(gòu)與已報(bào)道的其它CAV毒株一致，

3、長(zhǎng)度均為2298nt，包含有3個(gè)重疊的ORFs。與GenBank收錄的14個(gè)毒株進(jìn)行序列比較發(fā)現(xiàn)，所有毒株核苷酸序列的相似性在95.2％～99.5％之間，CAV全基因組序列有兩個(gè)高度變異區(qū)(HVR)，分別位于1033～1470nt和1858～2193nt，即ORF3的5’端2/5處和3’端2/5～l/5處。所測(cè)定15個(gè)CAV毒株基因序列推導(dǎo)的VP1、VP2和VP3氨基酸序列中均無(wú)缺失和插入。推導(dǎo)氨基酸序列的比較分析表明，VP1變異性最高

4、，其中75aa、97aa、125aa、139aa、144aa、287aa、370aa、413aa和447aa為9個(gè)高度變異位點(diǎn)；VP2最為保守；vP3有14個(gè)位點(diǎn)的氨基酸有差異，沒(méi)有明顯的定位規(guī)律。分析發(fā)現(xiàn)VP175aa、97aa、139aa和144aa四個(gè)位點(diǎn)上的氨基酸存在兩種密切的相互依存模式：位點(diǎn)144的谷氨酰胺總是伴隨著位點(diǎn)139的谷氨酰胺、位點(diǎn)97的異亮氨酸和位點(diǎn)75的亮氨酸；而位點(diǎn)144的谷氨酸或天冬氨酸總是伴隨著位點(diǎn)139

5、上的賴氨酸、97位點(diǎn)的蛋氨酸和75位點(diǎn)的纈氨酸。所有CAV毒株在VP1 139和144位點(diǎn)上氨基酸的凈電荷總為零，而位點(diǎn)75和97上的氨基酸卻都是疏水性、非極性氨基酸；VP1的140～143aa均非帶正電荷的氨基酸。分析發(fā)現(xiàn)，近年來(lái)CAV毒株ORF3中編碼主要抗原性多肽的核苷酸序列，正在發(fā)生不同程度的變異，但這種變異尚未導(dǎo)致VP1氨基酸發(fā)生大的突變。 分別建立了以CAV毒株全基因組核苷酸序列、ORF3核苷酸序列以及VP1氨基酸序

6、列為基礎(chǔ)的3個(gè)CAV毒株分子進(jìn)化樹(shù)。以CAV全基因組核苷酸序列和ORF3核苷酸序列為基礎(chǔ)繪制的分子進(jìn)化樹(shù)基本相似，可以將CAV毒株分為2個(gè)基因群。我國(guó)大部分CAV毒株屬于基因I群，與德國(guó)Cux-1株相似；部分毒株與日本G6株關(guān)系較為相近，屬基因Ⅱ群。 我國(guó)雞傳染性貧血的防控需要在分子流行病學(xué)監(jiān)測(cè)的基礎(chǔ)上，加大預(yù)防用疫苗研究的力度，采取以疫苗免疫和凈化種雞避免垂直傳播、使用SPF胚生產(chǎn)的活毒疫苗控制水平傳播為核心的綜合防制措施，才