CA軟膏的研制.pdf

1、目的：以CA為模型藥物，對(duì)外用皮膚給藥制劑——軟膏進(jìn)行研究。CA是一種免疫抑制劑，口服可治療排異反應(yīng)，特應(yīng)性皮炎等免疫性疾病，但是對(duì)于特應(yīng)性皮炎等皮膚病，口服給藥劑量大，易引起不良反應(yīng)，因此將其制備成局部外用制劑，以皮膚組織為滲透屏障，限制CA軟膏的全身吸收，從而達(dá)到治療特應(yīng)性皮炎，直達(dá)病灶，增強(qiáng)療效，降低不良反應(yīng)的目的。角質(zhì)層是皮膚的天然屏障，如何使CA能夠有效地被皮膚吸收而義盡可能減少或不進(jìn)入全身血液循環(huán)，是制備局部給藥制劑的關(guān)鍵。

2、 方法: 軟膏含量測(cè)定方法：建立高效液相測(cè)定軟膏含量的方法，對(duì)絕對(duì)回收率，相對(duì)回收率，精密度和靈敏度進(jìn)行考察。 制備工藝考察：通過單因素考察，采用熔融法制備 CA局部皮膚外用軟膏，以軟膏的性狀，含量及含量均勻度為評(píng)價(jià)指標(biāo)，在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上進(jìn)行水浴熔融溫度為60，70，80℃，攪拌時(shí)間為5，10，15mih和攪拌速度為4000，7000，10000r/min的三因素三水平正交試驗(yàn)確定制備軟膏的最佳工藝條件。

3、 促透劑篩選：將不同促透劑以5％的比例加入到軟膏中進(jìn)行40℃，RH75％的條件下試驗(yàn)，于0，15，30天取樣測(cè)定主藥含量考察藥物在促透劑中的穩(wěn)定性；將初步篩選的處方進(jìn)行家兔單次及多次刺激性試驗(yàn)，按照“皮膚刺激反應(yīng)評(píng)分表”評(píng)分及“刺激強(qiáng)評(píng)分表”篩選促透劑；最后以進(jìn)口軟膏為對(duì)照，利用Franz擴(kuò)散池進(jìn)行軟膏的體外滲透試驗(yàn)，建立高效液相測(cè)定接受液中主藥濃度的方法，對(duì)絕對(duì)回收率，相對(duì)回收率，精密度和靈敏度進(jìn)行考察，采用以尼龍膜為滲透屏障和以

4、鼠皮為滲透屏障的體外滲透試驗(yàn)相互印證，考察相同含量促透劑、不同粘度和相同粘度、不同含量促透劑軟膏的滲透行為，擬合方程并確定最佳促透劑含量及粘度。軟膏的質(zhì)量研究與穩(wěn)定性考察：對(duì)最佳處方進(jìn)行主藥含量及含量均勻度的考察，進(jìn)行高溫，高濕，強(qiáng)光條件下影響因素試驗(yàn)長(zhǎng)期試驗(yàn)，考察其外觀，含量。 急性毒性試驗(yàn)：以白色豚鼠為試驗(yàn)對(duì)象，涂抹大劑量受試物，對(duì)皮膚進(jìn)行急性毒性試驗(yàn)。將豚鼠按體重，性別隨機(jī)分為三組：給藥組，空白基質(zhì)組和空白對(duì)照組，分別考察

5、自制軟膏，空白賦型劑對(duì)豚鼠皮膚的急性毒性作用，并對(duì)各組豚鼠進(jìn)行體重，呼吸，體毛，四肢活動(dòng)，眼睛和粘膜，中樞神經(jīng)系統(tǒng)的觀察，并記錄死亡率。 致敏性試驗(yàn)：以白色豚鼠為試驗(yàn)對(duì)象，將其按體重，性別隨機(jī)分為三組：陽性對(duì)照組，給藥組和賦型劑組。陽性對(duì)照藥物為二硝基氯苯，并將其配置成7％致敏濃度和0.5％激發(fā)濃度兩種丙酮溶液，在第1，7，14天時(shí)涂抹致敏濃度溶液，28天時(shí)涂抹激發(fā)濃度溶液進(jìn)行激發(fā)，觀察其致敏現(xiàn)象。給藥組及賦型劑組按上述同樣方法

6、操作，與陽性對(duì)照組比較觀察致敏現(xiàn)象并計(jì)算致敏率。 藥效學(xué)試驗(yàn)：以家兔為試驗(yàn)動(dòng)物，建立特應(yīng)性皮炎模型，用二硝基氯苯對(duì)豚鼠進(jìn)行致敏，激發(fā)，最后結(jié)成厚痂，使豚鼠的皮膚形成特應(yīng)性皮炎。將豚鼠按體重，性別及結(jié)痂面積大小隨機(jī)分成四組：進(jìn)口軟膏對(duì)照組，給藥組，賦型劑組和空白組。前三組每天涂抹受試物兩次，12小時(shí)一次，連續(xù)涂抹12天，并對(duì)四組皮炎的狀態(tài)及面積進(jìn)行觀察，測(cè)量，以測(cè)定自制CA軟膏的療效。結(jié)果軟膏含量測(cè)定方法：建立的高效液相測(cè)定軟膏含

7、量的標(biāo)準(zhǔn)曲線為 A=12336C-7837.9(r=0.9999,n=7)，低，中，高三個(gè)濃度回收率分別是 100.2，100.4，99.67％，日內(nèi)，日間 RSD分別為1.5，1.4，2.1％和2.4，1.9，2.3％。 制備工藝：通過正交試驗(yàn)優(yōu)化了制備工藝，最后確定為：熔融溫度為70℃，攪拌時(shí)間為 10min及攪拌速度10000r/min。軟膏均勻細(xì)膩，含量合格。 促透劑選擇：在40℃，RH75％條件下，1＃，3

8、＃，4＃軟膏較穩(wěn)定，其他軟膏處方中CA的含量急劇降低：1＃促透劑對(duì)家兔皮膚輕度刺激，3＃，4＃軟膏對(duì)家兔無刺激：體外滲透試驗(yàn)建立的高效液相測(cè)定接受液中主藥濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線為A=13.479C-373.4(r=0.9999,n=5)，低，中，高三個(gè)濃度回收率分別是 104.6，101.1，98.47％日內(nèi)，日間RSD分別為4.0，1.4，1.8％和4.5，1.9，2.0％；以時(shí)間為橫坐標(biāo)，累積滲透量為縱坐標(biāo)擬合曲線表明，軟膏的滲透行為符合

9、Higuchi釋藥模型，以尼龍膜為滲透屏障和以鼠皮為滲透屏障的體外滲透試驗(yàn)結(jié)果趨勢(shì)一致，均為滲透速率隨著軟膏粘度的增加或促透劑含量的增高而降低。以進(jìn)口軟膏作為對(duì)照品，確定的處方為含有7.7％3＃促透劑的中等粘度的軟膏處方和含有10.9％4＃促透劑的中等粘度的軟膏處方。結(jié)合皮膚刺激性試驗(yàn)，最后確定的處方為3＃。軟膏的質(zhì)量研究：按3＃處方軟膏制備三批樣品，主藥平均含量為0.996mg/g，RH92.5％條件下軟膏含量明顯下降，無分層；60℃

10、條件下，軟膏含量第5天時(shí)測(cè)定含量變化不大，第10天時(shí)測(cè)定含量下降，膏體軟化，變?yōu)橐后w，混濁；40℃條件下含量變化不大，膏體軟化；4500±5001x條件下軟膏含量急劇下降：長(zhǎng)期試驗(yàn)在25℃，RH60％的條件下0，3，6，9個(gè)月的測(cè)定結(jié)果表明主藥含量穩(wěn)定。 急性毒性試驗(yàn)：去除受試物后，連續(xù)7天對(duì)動(dòng)物觀察顯示體重增長(zhǎng)正常，呼吸，四肢運(yùn)動(dòng)，眼睛及粘膜，體毛和中樞系統(tǒng)均正常，動(dòng)物無死亡。 皮膚致敏性試驗(yàn)：經(jīng)過二硝基氯苯的致敏激

11、發(fā)，陽性對(duì)照組豚鼠在第28天激發(fā)后均出現(xiàn)了陽性反應(yīng)，致敏部位皮膚呈現(xiàn)紫色紅斑，72小時(shí)后仍不褪去；給藥組和空白基質(zhì)組豚鼠致敏部位皮膚正常，72小時(shí)后持續(xù)呈陰性，顯示軟膏無致敏性。 藥效學(xué)試驗(yàn)：利用二硝基氯苯成功地制造出特應(yīng)性皮炎模型，炎癥部位呈現(xiàn)深紅色血痂；藥效學(xué)試驗(yàn)研究結(jié)果顯示，給藥組與市售進(jìn)口軟膏對(duì)照組的豚鼠皮炎愈合速度明顯快于賦型劑組和空白組，自制CA軟膏與市售進(jìn)口CA軟膏療效無顯著性差別；空白基質(zhì)療效與市售進(jìn)口CA軟膏有