常染色體顯性遺傳先天性白內(nèi)障基因突變篩查.pdf

1、主要研究?jī)?nèi)容:一、三個(gè)常染色體顯性遺傳先天性白內(nèi)障家系突變位點(diǎn)篩查;研究目的:對(duì)3個(gè)來(lái)自中國(guó)南方地區(qū)的常染色體顯性遺傳孤立性先天性白內(nèi)障家系(ADCC-1,ADCC-2和ADCC-3)進(jìn)行基因突變位點(diǎn)的篩查,以了解這三個(gè)家系的先天性白內(nèi)障與國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道的10個(gè)基因上17種突變是否相關(guān).二、CRYAB基因片段的克隆和序列分析;研究目的:通過(guò)第一部分實(shí)驗(yàn),在家系A(chǔ)DCC-3中發(fā)現(xiàn)CRYAB基因第443核苷酸位點(diǎn)發(fā)生了單個(gè)堿基置換(G→A),

2、由于PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的計(jì)算機(jī)自動(dòng)測(cè)序出現(xiàn)的雜峰較多,不利于結(jié)果分析,為了進(jìn)一步證實(shí)這一序列改變,我們將該家系9名家族成員(包括4名先天性白內(nèi)障患者和5名非患者)的CRYAB基因片段作為目的基因,將其在體外與質(zhì)粒載體重組,導(dǎo)入生物宿主細(xì)胞內(nèi),通過(guò)自主復(fù)制產(chǎn)生大量分子克隆,篩選鑒定陽(yáng)性重組體進(jìn)行擴(kuò)增和測(cè)序,確定目的基因的序列,以證實(shí)突變的存在.三、αB-晶狀體蛋白及其D140N突變體的生物信息學(xué)分析1、研究目的通過(guò)前面兩個(gè)部分實(shí)驗(yàn),在家系A(chǔ)D