托氟啶脂質體的研究.pdf

1、惡性腫瘤嚴重威脅人類健康，藥物治療是治療惡性腫瘤的三種基本療法之一。然而目前臨床應用的抗腫瘤藥物多具有無組織選擇性、較高毒副作用、不穩(wěn)定性以及半衰期短等缺點，所以前體藥物研究受到越來越多的關注。前藥是指在體外僅有很小或沒有藥理活性，在體內酶或非酶作用，經生物轉化成代謝產物原藥后才具有藥理活性的藥物。它保持或增強原藥的藥效，同時又克服了原藥的缺點，主要為了改善藥物在體內的藥物動力學過程，提高對靶部位的作用選擇性，降低毒副作用，改善藥物的穩(wěn)

2、定性等。 托氟啶(N<,3>-O-toluyl-Fluorouracil，TFu)即3-鄰甲苯甲酰基-氟尿嘧啶，是新一代5-氟尿嘧啶(5-Fu)前體藥物。前期研究工作表明，TFu具有明確的抗癌活性，體內代謝穩(wěn)定性好，可選擇性地在腫瘤組織內轉化為5一Fu而發(fā)揮藥效。但是該藥水溶性較差，不適合靜脈注射給藥，口服生物利用度也較低，限制了其臨床應用。 本課題旨在提高TFu的水溶性，制備可方便臨床應用的口服及靜注TFu新制劑；探索

3、一種生物利用度較高、藥物毒性低、穩(wěn)定性好的給藥系統(tǒng)。脂質體是最重要的、最廣泛使用的納米給藥系統(tǒng)之一，具有無毒，無免疫原性，組織相容性，能夠降低藥物的毒性，增強藥理作用等。目前，在各種納米載體中，只有脂質體已應用于臨床，其他的納米系統(tǒng)仍處于臨床前研究階段。 課題以大豆卵磷脂和膽固醇為主要膜材，以TFu為模型藥物，采用現代靶向制劑技術，制備了TFu脂質體，對TFu注射和口服脂質體給藥系統(tǒng)進行臨床前研究，研究不同粒徑TFu脂質體經不同

4、給藥途徑后在體內的藥物動力學行為和分布特征，并探討脂質體小鼠口服的吸收機理，為脂質體制劑的開發(fā)應用提供了試驗基礎和理論依據。課題主要研究方法和結果如下： 1．托氟啶脂質體藥物含量及包封率測定方法的建立采用魚精蛋白凝聚法將載藥脂質體與游離藥物分離，建立了HPLC法測定脂質體中TFu的含量及包封率。 2．托氟啶脂質體的制備工藝和處方研究以TFu脂質體包封率為主要考察指標，單因素考察有機相種類、藥脂比、磷脂和膽固醇比、有機相/

5、水相比例、水浴溫度等影響因素，在此基礎上，采用均勻設計法對TFu脂質體處方進行優(yōu)化，選用藥脂比、磷脂和膽固醇比、有機相/水相比例為考察因素，以包封率等為指標進行評價，得到TFu脂質體的優(yōu)化處方。 3．托氟啶脂質體的理化性質、體外釋藥動力學和穩(wěn)定性研究以及凍干脂質體的制備通過高壓勻質乳勻技術控制脂質體粒徑，不同乳勻壓力下(10bar、80bar、400bar和600 bar)脂質體的平均粒徑分別為530nm、400nm、320nm

6、和180nm，Zeta電位分別為-6.76 mV、-6.64 mV、-6.44 mV和-6.56 mV，多分散性指數分別為0.481、0.448、0.366和0.093，包封率分別為(88.54±2.5)﹪、(88.74±3.2)﹪、(85.64±4.1)﹪和(80.04±4.5)﹪，載藥量分別為(8.94±0.2)﹪、(8.94±0.3)﹪、(8.6±0.4)﹪和(7.94±0.4)﹪。 以TFu溶液為對照，采用動態(tài)膜透析法分

7、別考察四種粒徑的TFu脂質體在磷酸鹽緩沖液(pH7.4)以及人工胃液(pr1.2)，腸液(pn6.8)中的體外釋藥情況，結果表明四種粒徑脂質體在各介質中均有不同程度的緩釋作用。以粒徑為400nm的TFu脂質體為例，在PBS(pH7.4)和人工腸液中，TFu脂質體的體外釋藥符合雙相動力學方程： 100-Q=98。18e<-0.2735t+40.89e<'-0.028t>，R<,α>=0.9990，R<,B>=0.9963；和100-Q=9

8、6.00e<'-0.2934t>＋26.53e<'-0.027t>,R<,α>=0.9941，R<,B>=0.9931；而在人工胃液中，TFu脂質體釋放符合Weibull方程：In[-ln(1-Q)]-0.804Int-0.88，r=0.9915。TFu溶液在不同介質中的釋放均符合一級速率方程ln(100-Q)=-0.5585t+4.037，r=0.9984；ln(100-Q)=-0.7151t+4.2232，r=0.9965和ln(1

9、00-Q)=-0.567t+4.1207，r=0.9970。 穩(wěn)定性考察結果表明TFu脂質體(400nm)4~C貯存12個月時藥物滲漏率達37.77﹪，因此，為增加脂質體穩(wěn)定性，制備了冷凍干燥TFu脂質體，所得TFu脂質體凍干粉粉末均勻、疏松，具有良好的再分散性。DSC驗證TFu脂質體的形成，凍干后平均粒徑為(438.94±10.7)nm，多分散性指數為0.651；Zeta電位為-4.3mV，包封率為(75.15±3.9)﹪，載

10、藥量為(7.52±0.2)﹪，初步穩(wěn)定性實驗顯示其穩(wěn)定性良好(9個月)，達到了預期目的。 4．不同粒徑托氟啶脂質體口服和靜注小鼠體內動力學以及體內組織分布研究粒徑是決定納米給藥系統(tǒng)在體內吸收程度和靶向性的重要因素之一。課題以TFu混懸液組為對照，分別考察了小鼠口服四種粒徑TFu脂質體后藥物在體內藥物動力學性質，并考察了小鼠口服脂質體(400nm)后藥物在體內的分布。結果表明，脂質體粒徑對藥物在胃腸道的吸收有顯著的影響，小鼠口服

11、四種粒徑的TFu脂質體(530nm、400nm、320nm、180nm)相對于口服TFu混懸液的生物利用度分別為160.5﹪，198.9﹪，221.6﹪和260.3﹪，TFu脂質體口服吸收的生物利用度隨脂質體粒徑的減小而增大，將水不溶性藥物TFu制備成小粒徑(180nm)的脂質體可以顯著提高其口服吸收的生物利用度(p<0.01)。小鼠口服脂質體的體內分布研究表明，脂質體在提高血藥濃度的同時，也提高了某些組織的吸收，如肝、肺、脾等。

12、 以TFu 50﹪乙醇溶液為對照，研究小鼠靜注不同粒徑TFu脂質體(530nm,400nm和180nm)后體內藥物動力學性質，并考察小鼠靜注不同粒徑TFu脂質體后藥物在心、肝、脾、肺、腎、腦及血漿等組織器官中的蓄積情況，并通過藥動學參數和靶向性參數對脂質體進行靶向性評價。很多文獻指出，脂質體靜脈注射后可迅速地被體內網狀內皮系統(tǒng)吞噬，因而選擇性地分布于網狀內皮系統(tǒng)豐富的器官，如肝和脾等，出現較高的局部藥物濃度，即被動靶向。試驗結果表明脂

13、質體粒徑變化顯著改變了藥物的體內配置：粒徑范圍在530nm～400nm的脂質體表現了被動靶向特性，與藥物溶液相比，藥物在肝、脾蓄積增加最為顯著(p<0.01；p<0.01)，心、腎蓄積明顯減少(p<0.01；p<0.01)，因而可在一定程度上減小藥物可能引起的心臟毒性及腎毒性；而小粒徑脂質體(180nm)由于粒徑減少而避免了網狀內皮系統(tǒng)吞噬，明顯延長藥物體內滯留時間，增加血藥濃度，提高生物利用度，可滿足長循環(huán)的要求。 5．托氟啶

14、脂質體促進TFu口服吸收的機制研究托氟啶脂質體口服可促進藥物吸收，因此課題比較各種影響因素，如能量抑制劑、空白脂質體、固體分散體等，采用口服試驗、小鼠外翻腸囊實驗等方法對脂質體口服促吸收機理進行探討。與對照組相比，加入空白脂質體對TFu的口服吸收無顯著影響(p>0.05)；能量抑制劑DNP可顯著增加TFu的吸收，因此脂質體中TFu的小鼠小腸吸收過程可能不需要載體，非能量依賴。小鼠外翻腸囊實驗結果表明，TFu脂質體單位面積吸收量呈劑量依賴

15、，符合Fick’s擴散定律，表明TFu脂質體主要以被動擴散的方式吸收。 TFu脂質體在胃/腸勻漿物中孵化24小時后包封率均有所下降，雖仍有50﹪以上的包封藥物，但與PBS7.4緩沖液組相比，其包封率在24h分別下降17﹪和5﹪，表明脂質體在胃、腸中有部分遭到破壞，穩(wěn)定性下降。 小鼠外翻腸囊實驗考察不同粒徑TFu脂質體溶液在腸囊內、外的包封率的變化，腸管內包封率均在．1～0﹪范圍內變化，而管外脂質體隨著時間的推移，包封率均有所下降

16、，可能TFu脂質體并不是以完整形式透過腸壁膜，主要以游離形式透過腸膜；腸壁通透性和腸吸收結果表明不同粒徑脂質體在小腸內的單位吸收量和腸壁通透性有差異性變化(p<0.01)，小粒徑脂質體(180nm)的單位吸收量和腸壁通透性都明顯增加(p<0.01)。 為進一步了解脂質體對TFu吸收的影響，制備TFu脂質固體分散體并與脂質體比較。結果表明，小鼠口服TFu固體脂質分散體和脂質體后，其口服生物利用度無顯著性差異(p>0.05)。脂質體

17、的雙分子層結構可能沒有明顯的優(yōu)勢保護藥物并促進藥物口服吸收。但是藥物在固體分散體中很不穩(wěn)定，容易老化，放置2個月后，其釋放曲線規(guī)律性很差，釋放百分率變化率超過20﹪，影響藥物的療效，限制其廣泛應用；而脂質體具有更好的穩(wěn)定性、均勻性和質量可控性，便于靜脈注射等，可作為良好的藥物載體，開發(fā)適宜臨床應用的TFu新劑型。 綜上，未加任何修飾的普通納米脂質體很可能在經胃腸道吸收過程中遭到部分破壞，TFu在體小鼠小腸的口服吸收可能不需要載體