廣西HIV感染基因診斷方法的建立.pdf

1、目的： 針對廣西HIV主要流行毒株gag、pol、env基因區(qū)建立一種早期、快速、可行的多重巢式逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測方法。 方法： 1.根據(jù)廣西HIV主要流行毒株gag、pol、env 3個基因的保守序列，分別設(shè)計2套巢式RT-PCR引物。 2.應(yīng)用已建立的巢式RT-PCR對60份經(jīng)蛋白免疫印跡試驗(WB)確證的HIV陽性血樣進(jìn)行檢測，計算檢出率。 3.從gag、pol、env區(qū)

2、分別選擇一套最佳引物，用巢式RT-PCR對60份陽性樣本和30份陰性樣本進(jìn)行檢測，并將檢測結(jié)果與血清學(xué)檢測結(jié)果比較，計算靈敏度和特異度，然后隨機(jī)選取20份陽性樣本重復(fù)檢測3次，對檢測方法的重復(fù)性進(jìn)行評價。 4.從gag、pol、env 3個基因區(qū)分別選擇1套巢式RT-PCR引物，搭配組合成2組多重套巢式RT-PCR反應(yīng)體系，應(yīng)用降落PCR技術(shù)，在同一反應(yīng)管中對以上60份HIV陽性樣本和30份HIV陰性樣本進(jìn)行檢測，檢測結(jié)果與血清