用定點突變及基因轉(zhuǎn)染方法建立EBV體外感染細胞模型.pdf

1、該文進行如下研究: (一)利用寡核苷酸介民的基因定點突變技術(shù)先后在小鼠CR2受體基因中引入了P15S和T68Y兩個特定突變,并經(jīng)測序證實.(二)采用體外基因重組技術(shù)構(gòu)建了含有野生型和突變小鼠CR2基因以及人 CR2基因cDNA的逆轉(zhuǎn)錄病毒真核表達載體(pLXN-wtmCR2/1、pLXSN-mtmCR2/1、pLXSN-hCR2),使目的基因的表達受到異源性MMLV-LTR中強啟動子的調(diào)控.(三)從B95-8細胞中抽提EB病毒并采用 臍

2、帶血轉(zhuǎn)化實驗對其滴度進行鑒定,結(jié)果顯示病毒活性好,尤以10<'-2>和10<'-3>兩個滴度的病毒活性最好.(四)利用MouseAtlascDNAExpressionArrays, 作者進一步對EB病毒進入細胞前后以及TPA處理細包前后細胞基因表達譜進行了研究.(五)采用生物信息學對突變前后小鼠SCR1-2二給結(jié)構(gòu)及三級結(jié)構(gòu)進行預測,預測結(jié)果提示突變對小鼠SCR1-2的二級與三級結(jié)構(gòu)均有明顯的影響,三級結(jié)構(gòu)的預測結(jié)果更說明突變后的小鼠S