豬源鏈球菌的分離鑒定及其生物學(xué)特性研究.pdf

1、近年來，豬鏈球菌病在我國廣泛流行并致病，已成為嚴(yán)重危害養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的主要病原菌之一。本研究對(duì)豬源鏈球菌的病原流行病學(xué)、毒力特性、生物學(xué)特性等進(jìn)行了系統(tǒng)研究，得到了以下研究結(jié)果：
　　1.通過對(duì)豬源鏈球菌的分離鑒定（2014.09～2015.12），并對(duì)前期實(shí)驗(yàn)室分離鑒定結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析（2011.01～2014.08），結(jié)果表明，2011～2015年間，從河南及其周邊地區(qū)規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)和部分散養(yǎng)農(nóng)戶2521份發(fā)病豬的肺臟等病料組織中分離

2、鑒定出772株鏈球菌（Streptococcus），總分離率為30.6％。通過基于gdh基因的特異性PCR方法對(duì)其中310株豬源鏈球菌進(jìn)行了PCR鑒定，共鑒定出135株豬鏈球菌（S. suis），占43.5%。通過基于cps基因的特異性PCR方法對(duì)135株豬鏈球菌進(jìn)行了血清型鑒定，共鑒定出72株豬鏈球菌2型（占53.3%），14株7型（占10.4%），14株9型（占10.4%），2株1型（占1.5%），33株其他型（占24.4%）。這表

3、明在我國河南及其周邊省份的豬群中，鏈球菌為分離率最高的細(xì)菌性病原，其中豬鏈球菌仍占重要地位（占43.5%），在豬鏈球菌中，血清2型占主導(dǎo)地位（占53.3%）。
　　2.2011～2015年間，豬源鏈球菌的分離率介于23.5～45.5%之間，其中2011年和2014年顯著偏高（P＜0.01）。另外發(fā)現(xiàn)其分離率具有明顯的季節(jié)性，其中2～5月和8月份顯著偏高（P＜0.01）。在分離出鏈球菌的772份病料中，有274份僅分離出鏈球菌，沒有

4、發(fā)現(xiàn)其他常見病原菌，占35.5%；有498份同時(shí)分離出各種不同的共感染菌，占64.5%。鏈球菌最常見的共感染菌是副豬嗜血桿菌占所有共感染病料的47.4%；（236/498），其次是大腸埃希菌（35.3%；176/498）、多殺性巴氏桿菌20.9%；（104/498）、支氣管敗血波氏桿菌（15.3%；76/498）、葡萄球菌（6.2%；31/498）、沙門氏菌（6.1%；30/498）和胸膜肺炎放線桿菌（1.0%；5/498）。這表明在豬

5、鏈球菌病的發(fā)生具有明顯的季節(jié)性，且與其他病原菌的共感染情況非常嚴(yán)重。
　　3.對(duì)分離鑒定的49株豬鏈球菌，包括2型26株、7型14株、9型9株，和實(shí)驗(yàn)室前期分離鑒定的2株 C群馬鏈球菌獸疫亞種強(qiáng)毒菌株進(jìn)行了小鼠毒力試驗(yàn)，結(jié)果表明C群馬鏈球菌獸疫亞種的菌株毒力表現(xiàn)最強(qiáng)，其次是豬鏈球菌2型、7型和9型菌株。分別選擇小鼠毒力試驗(yàn)中表現(xiàn)最強(qiáng)的豬鏈球菌2型3株、7型3株、9型3株和2株C群馬鏈球菌獸疫亞種菌株（共11株鏈球菌），進(jìn)一步進(jìn)行仔

6、豬毒力試驗(yàn)，結(jié)果表明2株 C群馬鏈球菌獸疫亞種菌株和3株豬鏈球菌2型菌株的攻毒仔豬均能出現(xiàn)典型豬鏈球菌病的臨床癥狀和病理變化，3株豬鏈球菌9型菌株中有1株（SS9-6）能導(dǎo)致攻毒仔豬出現(xiàn)典型臨床癥狀和病理變化；但是3株豬鏈球菌7型菌株均不能。這表明在我國豬鏈球菌病的病原中， C群馬鏈球菌獸疫亞種和豬鏈球菌2型菌株的致病力較強(qiáng)，而豬鏈球菌7型和9型較弱。另外，各血清型豬鏈球菌的小鼠毒力試驗(yàn)結(jié)果和仔豬毒力試驗(yàn)結(jié)果并不完全一致。
　　4

7、.以C群馬鏈球菌獸疫亞種 M1株和豬鏈球菌2型 SS2-2株為代表菌株進(jìn)行了培養(yǎng)基篩選試驗(yàn)。在含10%新生牛血清的TSA培養(yǎng)基、牛血清瓊脂培養(yǎng)、鮮血瓊脂培養(yǎng)基基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基和巧克力瓊脂培養(yǎng)基共5種固體培養(yǎng)基中，2株菌株均在含10%新生牛血清的TSA中生長最快。在含10%新生牛血清的TSB培養(yǎng)基、馬丁肉湯培養(yǎng)基、硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基（TM）、THB和 BHI共5種液體培養(yǎng)基中，2株菌株均在含10%新生牛血清的TSB中生長活菌含量最高。對(duì)

8、上述的11株鏈球菌進(jìn)一步研究了其在TSA固體培養(yǎng)基上的培養(yǎng)試驗(yàn)，結(jié)果表明，豬鏈球菌2型、7型、9型菌株之間的生長速度無明顯差異，其24h培養(yǎng)菌落的直徑介于1.62～1.88 mm之間，但 C群菌株的生長速度顯著偏快（P＜0.01），其平均直徑為3.24 mm。在TSB液體培養(yǎng)基中的生長曲線測(cè)定結(jié)果表明，11株鏈球菌的最高活菌含量介于8.4×108～1.2×109 CFU/mL之間，均能高密度發(fā)酵培養(yǎng)。21種生化反應(yīng)的試驗(yàn)比較結(jié)果表明，1