BMP9對骨肉瘤細(xì)胞系143B生物學(xué)行為的影響.pdf

1、骨肉瘤是最常見的惡性骨腫瘤之一。盡管治療模式不斷發(fā)展，但因其腫瘤細(xì)胞的侵襲和遷移，導(dǎo)致其致死率居高不下。骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMPs)是信號分子轉(zhuǎn)錄生長因子β(TGFβ)超家族的一員，之前已有研究表明，它與骨肉瘤的生物學(xué)行為密切相關(guān)。有些文獻(xiàn)報(bào)道，BMP2-8在骨肉瘤臨床標(biāo)本中均有不同程度的異常表達(dá)。但是，BMP9在骨肉瘤發(fā)生發(fā)展過程中的作用尚不清楚。本研究通過檢測兩株骨肉瘤細(xì)胞系中BMP9內(nèi)源性表達(dá)后，將腺病毒感染表達(dá)相對較低的骨肉瘤細(xì)胞

2、系，觀察BMP9表達(dá)水平上調(diào)后，骨肉瘤細(xì)胞在細(xì)胞增殖，遷移，侵襲，凋亡，細(xì)胞周期，集落形成及裸鼠成瘤能力等方面的影響，為骨肉瘤的臨床診斷及分子治療尋求理論依據(jù)。
　　 方法:
　　 1.HEK293細(xì)胞中AdBMP9的擴(kuò)增并測定它的感染滴度。
　　 2.用RT-PCR及Western Blot的方法鑒定BMP9在143B、MG63和U-2OS細(xì)胞中的內(nèi)源性表達(dá)，以及AdBMP9感染表達(dá)量相對較低細(xì)胞系143B后的

3、BMP9的表達(dá)水平變化。
　　 3.將AdBMP9感染表達(dá)量相對較低細(xì)胞系143B后，用MTT檢測細(xì)胞的增殖、劃痕愈合實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞的遷移能力、Transwell實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞的侵襲能力、Hoechst染色實(shí)驗(yàn)和流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞的凋亡以及細(xì)胞周期、平板集落形成實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞的集落形成能力。
　　 4.分別將已經(jīng)感染好病毒的各細(xì)胞組別按照一定的細(xì)胞數(shù)量接種于BALB/c-nu裸鼠后，20d左右頸椎脫臼處死，計(jì)算瘤體重量，體積，

4、觀察BMP9對裸鼠成瘤能力的影響。
　　 結(jié)果:
　　 1.AdBMP9感染過后HEK293細(xì)胞中可觀察到綠色熒光，加入病毒72 h后感染率約90％左右;計(jì)算得出病毒滴度為:2×1011IU/ml。
　　 2.RT-PCR和Western Blot檢測至143B、MG63和U-2OS細(xì)胞中均有BMP9的表達(dá);且在143B細(xì)胞中的表達(dá)量最低。
　　 3.AdBMP9感染內(nèi)源性表達(dá)BMP9低的143B細(xì)胞后，

5、其BMP9表達(dá)明顯增加，結(jié)果顯示BMP9可在143B細(xì)胞中成功過表達(dá)。
　　 4.MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:經(jīng)AdBMP9處理的143B細(xì)胞48h后，143B細(xì)胞的增殖較對照組減少17％，72h后，143B細(xì)胞的增殖仍較對照組減少38％，提示BMP9可以抑制143B細(xì)胞的增殖。
　　 5.劃痕愈合實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:經(jīng)AdBMP9處理的143B細(xì)胞24h后，劃痕愈合率為對照組愈合率的45％，提示BMP9可以抑制143B細(xì)胞的遷移。<

6、br>　　 6.Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:經(jīng)AdBMP9處理的143B細(xì)胞24h后，穿膜細(xì)胞數(shù)較對照組減少48％。這提示BMP9可以抑制143B細(xì)胞的侵襲能力。
　　 7.Hoechst染色和流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示:經(jīng)AdBMP9處理的143B細(xì)胞24h后，凋亡率較對照組增加46％，48h后143B細(xì)胞的凋亡率仍較對照組增加63％，提示BMP9可以促進(jìn)143B細(xì)胞的凋亡。
　　 8.流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示:經(jīng)AdBM

7、P9處理的143B細(xì)胞更容易被阻滯在G2/M期。
　　 9.平板集落形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:經(jīng)AdBMP9處理的143B細(xì)胞18d后，集落形成率較對照組減少48％，提示BMP9可以抑制143B細(xì)胞集落形成能力。
　　 10.裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:經(jīng)AdBMP9處理的143B細(xì)胞，接種于裸鼠后，可見瘤體重量和體積分別較對照組減小53％、49％，都明顯小于對照組，提示BMP9可以抑制裸鼠成瘤能力。
　　 結(jié)論:
　　

8、 1.在HEK293細(xì)胞中可以將AdBMP9成功擴(kuò)增。
　　 2.骨肉瘤細(xì)胞系143B、MG63和U-2OS中均有BMP9的表達(dá)，且在143B細(xì)胞中表達(dá)量最低。
　　 3.本實(shí)驗(yàn)中所應(yīng)用的重組腺病毒AdBMP9可以在143B細(xì)胞中成功得以表達(dá)。
　　 4.BMP9能明顯抑制143B細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲、集落形成能力并促進(jìn)其細(xì)胞的凋亡，體內(nèi)試驗(yàn)中，BMP9還可以抑制裸鼠的成瘤能力，這些結(jié)果提示了BMP9可能參與