非洲豬瘟病毒抗原SLA--Ⅰ限制性CD8+T細(xì)胞表位的研究.pdf

1、非洲豬瘟(African swine fever, ASF)是由非洲豬瘟病毒(African swine fever virus，ASFV)引起的一種急性、熱性和傳染性疾病。僅發(fā)生于豬和野豬，發(fā)病率和死亡率幾乎達(dá)100％，是尚未傳入我國的重要烈性病。自1921年在非洲東部國家肯尼亞首次發(fā)現(xiàn)該病以來，ASF不斷蔓延傳播，給傳入國造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。ASF被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)列為必須通報(bào)的烈性傳染病，在我國動(dòng)物疫病病種名錄中被列為

2、“一類動(dòng)物疫病”。而且目前尚無有效的針對ASF的商品化疫苗。
　　對于ASF疫苗的研究國外已有很多報(bào)道，但滅活苗、弱毒苗、亞單位疫苗等傳統(tǒng)疫苗均不能提供有效的免疫保護(hù)。近期的研究表明，體液免疫無法對ASF感染的豬產(chǎn)生有效的免疫保護(hù)，只能延緩病情發(fā)作，而CD8+T介導(dǎo)的細(xì)胞免疫在抵抗ASFV感染中發(fā)揮關(guān)鍵作用，清除豬體內(nèi)的CD8+T細(xì)胞后疫苗完全失去保護(hù)效力。因此，在ASF疫苗的研制中，急需探尋一種能有效激活T細(xì)胞免疫應(yīng)答的免疫方式

3、。CD8+T識別由抗原遞呈細(xì)胞MHC-Ⅰ分子遞呈的抗原多肽，因此本研究目標(biāo)在于篩選能夠誘發(fā)細(xì)胞免疫的ASFV抗原MHC-Ⅰ限制性短肽以及疫苗載體。
　　ASFV的蛋白p72、p54、p30和CD2v是4種很重要的抗原蛋白。p72蛋白是病毒粒子的主要結(jié)構(gòu)蛋白。p54蛋白是病毒早期感染及病毒生存所必需的一種蛋白，可能介導(dǎo)病毒的吸附和侵入細(xì)胞過程。p30是磷蛋白，參與ASFV吸附易感細(xì)胞。CD2v蛋白與宿主細(xì)胞CD2蛋白相似，在紅細(xì)胞結(jié)

4、合感染細(xì)胞和胞外病毒粒子過程中是必需的，吸附到紅細(xì)胞表面的特性與ASFV在易感動(dòng)物體內(nèi)擴(kuò)散有重要關(guān)系。有研究表明，針對p72、p54、p30、CD2v的DNA疫苗可以誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生針對ASFV的細(xì)胞免疫應(yīng)答，對ASFV感染產(chǎn)生部分保護(hù)力。
　　本研究構(gòu)建和拯救了表達(dá)ASFV p72、p54、p30和CD2v蛋白的重組DNA載體、重組新城疫病毒(Newcastle disease virus，NDV)和重組痘苗病毒(Vaccinia

5、virus，VV)，并對黑龍江現(xiàn)地豬進(jìn)行免疫評價(jià)，以找出能有效增強(qiáng)針對ASFV細(xì)胞免疫的免疫方式。通過對比不同實(shí)驗(yàn)組使用不同疫苗組合免疫后ELISPOT的數(shù)據(jù)，結(jié)果顯示以重組DNA初免、兩次重組痘苗病毒加強(qiáng)免疫能更有效的誘發(fā)豬的細(xì)胞免疫應(yīng)答。同時(shí)，對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物豬的SLA-Ⅰ進(jìn)行分類，將之與ELISPOT的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相聯(lián)系，得到了實(shí)驗(yàn)所用4種蛋白中能誘發(fā)具有不同SLA-Ⅰ背景豬細(xì)胞免疫反應(yīng)的多肽組合。本研究對防制ASF的疫苗進(jìn)行了探索，得到的