腫瘤抗原MAGE-n HLA-A2限制性CTL表位的預測及鑒定.pdf_第1頁
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1、全文分為以下三個部分:第一部分:表位預測目的 預測MAGE-n抗原的一般生物學特性及HLA-A2限制性CTL表位.方法 用SYFPEITHI超基序法遠程預測系統(tǒng)和量化基序多項式法結合的預測方法,篩選新的MAGE-n抗原HLA-A2限制性CTL表位作為侯選表位.應用ANTHEPROTV5.0軟件預測MAGE-n編碼蛋白的一般生物學特性.結論SYFPEITHI超基序法和量化基序多項式法結合的預測方法可提高表位預測的效率及準確性.第二部分:預

2、測表位的免疫學特性,目的用表位重建技術、ELISPOT及特異性殺傷實驗研究HLA-A2限制性CTL候選表位的結合力及免疫活性.方法 對預測的抗原表位進行固相合成,并用HPLC進行純化,質(zhì)譜法(MS)鑒定.侯選表位與HLA-A2位點的親和力及結合穩(wěn)定性用競爭結合抑制實驗、T2結合穩(wěn)定性實驗及MHC-肽復合體穩(wěn)定性實驗測定.RT-PCR法檢測HCC細胞系MAGE-n表達.脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法構建MAGE-n基因轉(zhuǎn)染細胞系.應用ELISPOT技術檢測

3、抗原肽特異性釋放IFN-γ的T細胞頻數(shù).從HLA-A2陽性健康志愿者外周血分離單個核細胞(PBMC),用T2細胞負載MAGE-n抗原肽反復刺激活化(每周1次,共4次)誘導抗原肽特異性CTL.乳酸脫氫酶(LDH)釋放法測定誘導CTL對表達MAGE-n的HLA-A2陽性HCC細胞的識別及殺傷效應.結論 該研究證實表位重建技術結合免疫學方法(ELISPOT,LDH細胞毒實驗)可提高表位研究的效率和準確性.實驗篩選出的MAGE-n抗原表位QLV

4、FGIEVV可作為特異性免疫治療的靶分子而應用于HLA-A2陽性肝癌患者免疫治療.第三部分:荷人肝癌SCID小鼠抑瘤實驗目的研究MAGE-n抗原表位QLVFGIEVV特異性CTL對荷人肝癌SCID小鼠的抑瘤作用.方法 用HHCC(HLA-A2<'+>,MAGEn<'+>細胞皮下接種建立SCID小鼠荷瘤模型.用T2細胞負載抗原肽QLVFGIEVV反復刺激活化從HLA-A2陽性健康志愿者外周血單個核細胞(PBMC)誘導抗原肽特異性CTL.動

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