NY-BR-1在中國乳腺癌患者中的表達及其HLA-A2限制性CTL表位免疫鑒定.pdf

1、該研究擬鑒定乳腺癌高度限制性高表達的抗原,并研究其免疫原性.結(jié)合量化基序法和多項式法預(yù)測方案分析預(yù)測NY-BR-1的HLA-A2制性表位多肽,選擇其中評分最高的三個表位肽MLLQQNVDV(167~175)(307.98)YLLHENCML(1043~1051)(100.32)、NMWLQQQLV(1274~1282)(358.11)作進一步的分子模擬和與HLA-A2親和力的研究.經(jīng)計算機模擬與分子動力學(xué)<'[7]>計算顯示,三個候選表

2、位肽均能與HLA-A2分子結(jié)合,錨點殘基的距離均在15-20埃之間,各候選肽與陽性肽具有相似的非鍵能、氫鍵數(shù)符合HLA-A2限制性CTL表位的要求.采用標準Fmoc方案在多肽合成儀ABI431A型上進行,多肽一樹脂復(fù)合物的切割采用三氟乙酸合成候選肽,并用中壓液相色譜儀純化,反相高壓液相色譜儀(RP-HPLC)鑒定純度.候選肽與HLA-A2的親和力進一步用T2細胞的結(jié)合實驗驗證,結(jié)果以熒光系數(shù)(FI)作為檢測指標(FI=(候選肽的MFI-

3、背景MFI)/背景MFI).各肽的熒光系數(shù)分別為,陽性肽MAGE、MLLQQNVDV(167~175)(1.444)、YLLHENCML(1043~1051)(1.383)、NMWLQQQLV(1274~1282)(1.506),三個候選肽均與HLA-A2有較高的親和力.運用Elispot和標準的<'51>Cr釋放實驗對候選肽在體外的免疫原性進行研究.ELISPOT檢測HLA-A2陽性的健康人外周血單個核細胞(PBMC)是否有候選肽特異