SSX基因家族HLA-A0201限制性CTL共同表位預(yù)測、鑒定及其交叉反應(yīng)性研究.pdf

1、基于抗原表位肽的疫苗，由于其中表位肽的化學成分相對簡單、穩(wěn)定、容易構(gòu)建、可以避免各種污染及潛在的致癌物質(zhì)等方面的優(yōu)勢，已經(jīng)成為腫瘤免疫治療研究的主要策略之一。目前這種疫苗形式中的抗原表位肽主要是來源于腫瘤/睪丸抗原(Cancer/testisantigen，CT抗原)。SSX基因家族是CT抗原之一，與其它多成員組成的CT抗原家族一樣，它由9個不同成員組成。在某一種腫瘤細胞中不會同時表達所有SSX家族成員，而是僅表達其中一種或幾種。如對6

2、種不同組織類型的10個滑膜肉瘤細胞系，進行SSX-1、SSX-2、SSX-3、SSX-4、SSX-5的mRNA表達調(diào)查發(fā)現(xiàn)，其表達陽性率分別為90％、50％、10％、60％和50％，兩種以上基因同時表達的達60％，全部此類腫瘤細胞至少表達一種上述基因。而對26例原發(fā)性肝癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)組織進行SSX-1、SSX-2和SSX-5的mRNA表達分析，其表達陽性率分別為61.5％、34.6％和46.

3、2％，兩種以上基因同時表達的有4例(15.4％)，至少有一種基因表達的有17例(65.4％)。因而針對其中某一種成員的抗原表位肽腫瘤疫苗的實際應(yīng)用將會存在一定的局限性?；诖耍芯块_發(fā)能同時針對整個SSX家族所有成員的表位肽疫苗將會有廣闊的應(yīng)用前景。 本課題將SSX家族的9個成員分別輸入林治華教授基于超基序結(jié)合量化基序列開發(fā)的CTL表位預(yù)測軟件，并結(jié)合著名的美國國立衛(wèi)生研究所的BIMAS軟件(http：//www-bimas.c

4、it.gov/molbio/hla_bind/)和德國海德堡生物醫(yī)學信息中心根據(jù)特定肽的錨定殘基和輔助殘基位置的氨基酸類型來評分的SYFPEITHI軟件 (http：//www.syfpeithi.de/)，分析它們的預(yù)測結(jié)果。發(fā)現(xiàn)SSX57-65是所有成員中預(yù)測分值相對較高的肽片段，并且它們之間的序列相似程度非常高，僅在第1、8、9位上有所區(qū)別，而其它位點序列完全一致。根據(jù)這些結(jié)果，我們合成了可以代表SSX57-65全部成員的

5、4條肽，即(1)P1：AMTKLGFKA(SSX-2，SSX-3，SSX-5，SSX-7，SSX-9)，(2)P4：AMTKLGFNV(SSX-6，SSX-8)，(3)P5：AMTKLGFKV(SSX-1)，(4)P6：VMTKLGFKV(SSX-4)。在分析此4條預(yù)測表位肽與MHC-Ⅰ分子結(jié)合的親和力大小和結(jié)合穩(wěn)定性的基礎(chǔ)上，我們再用它們在體外刺激健康人PBMC，用可以評價特異性CTL的INF-γ/ELISPOT和細胞毒功能的51Cr

6、釋放實驗，檢測這些表位肽的免疫學效應(yīng)；最后，進一步分析這些表位肽誘導(dǎo)的CTL，對不同的表位肽的交叉反應(yīng)。 實驗研究顯示，在親和力測定中，這些預(yù)測的SSX57-65表位肽除P1外，P4、P5、P6等3條肽都隨著表位肽濃度的增加，而表現(xiàn)與MHC-Ⅰ分子結(jié)合的親和力增強；而在結(jié)合穩(wěn)定性實驗中，P1和P4與MHC-Ⅰ分子結(jié)合的穩(wěn)定性優(yōu)于P5和P6。在評價免疫學效應(yīng)的檢測中，P4誘導(dǎo)的特異CTL分泌INF-γ的能力和細胞毒功能，都優(yōu)于其它

7、3條肽，且在交叉激活評估中表現(xiàn)出同樣的結(jié)果。 根據(jù)這些結(jié)果，說明SSX57-65表位肽可以作為SSX家族不同成員之間共同的抗原表位肽，且P4(AMTKLGFNV)可以視為SSX57-65表位肽中的“超級表位肽”。后續(xù)的研究可以根據(jù)文獻中成功的表位肽改造方法，對P4個別氨基酸進行替換，以期在抗原性沒有改變的情況下，進一步提高P4表位肽的交叉激活能力，使其成為高效“超級表位肽”?？梢灶A(yù)期這種“超級表位肽”能夠成為對多成員組成的SSX