湖北五峰土家族婦女HPV16型E7抗原限制性CTL表位的初步研究.pdf

1、目的:
　　初步研究湖北五峰土家族婦女人乳頭瘤病毒16型E7抗原限制性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞表位,為該地區(qū)遠(yuǎn)期表位抗原的特異性鑒定和臨床研究提供靶肽。
　　方法:
　　使用NetMHCpan軟件預(yù)測HPV16型E7抗原CTL表位,采用標(biāo)準(zhǔn)的Fmoc方案合成多肽,產(chǎn)物采用RP-HPLC純化、分析,并進(jìn)行質(zhì)譜分析鑒定;選取湖北五峰縣土家族健康婦女和原發(fā)性宮頸癌各30名并提取外周血DNA,使用按照優(yōu)諾基 HLA-SSO流式熒光微

2、珠基因分型試劑盒進(jìn)行 HLA分型,篩選出HLA-A*02+健康婦女和 HLA-B*07+宮頸癌患者各5名,采集外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs)用E7肽體外刺激進(jìn)行免疫學(xué)實(shí)驗(yàn),采用ELISOT技術(shù)檢測IFN-γ斑點(diǎn)形成細(xì)胞數(shù)(Spots Forming Cells,SFCs)水平的差異并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果
　　經(jīng)RP-HPLC純化后,多肽產(chǎn)物純度均在95％以上,采用質(zhì)譜法鑒定出多肽實(shí)測分子量與理論值相吻合,鑒定為高純度的

3、目標(biāo)肽。
　　E7肽體外刺激 HLA-A*02+健康人PBMCs誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生了顯著的CTLs反應(yīng),IFN-γ斑點(diǎn)形成細(xì)胞數(shù)目明顯。組間差異用方差分析,組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=15.17,P<0.001),兩兩比較進(jìn)行 LSD檢驗(yàn),與陰性對(duì)照組比較,實(shí)驗(yàn)組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,其中以P2:E741-55、P4:E751-65差異最顯著(P<0.05),二者無顯著性差異。
　　E7肽體外刺激 HLA-B*07+宮頸癌患者 P B

4、MCs未能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生顯著的CTLs反應(yīng),INF-γ斑點(diǎn)形成細(xì)胞數(shù)目少,組間差異用方差分析,組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=40.26,P<0.001),兩兩比較進(jìn)行LS D檢驗(yàn),與陰性對(duì)照組比較,以P5:E766-80差異最顯著,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　HLA-A*02+健康人與HLA-B*07+宮頸癌患者ELISPOT結(jié)果提示INF-r斑點(diǎn)形成細(xì)胞數(shù)目有明顯差異,且差異性有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=268.82,P<0.001)

5、。
　　對(duì)不同多肽誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生 CTLs反應(yīng)結(jié)果進(jìn)行 SNK檢驗(yàn),P2:E741-55、P4:E751-65和P5:E766-80三條多肽對(duì)結(jié)果的影響最明顯,與其他多肽比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),但三者間尚不能認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論:
　　HLA-A*02能有效呈遞HPV16型E7抗原肽誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生顯著性C TLs反應(yīng);HLA-B*07不能有效呈遞HPV16型E7抗原肽誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生顯著性CTLs反應(yīng);E