湖北五峰土家族婦女HPV16型E7抗原限制性CTL表位的初步研究.pdf

1、目的:
　　初步研究湖北五峰土家族婦女人乳頭瘤病毒16型E7抗原限制性細胞毒性T淋巴細胞表位,為該地區(qū)遠期表位抗原的特異性鑒定和臨床研究提供靶肽。
　　方法:
　　使用NetMHCpan軟件預測HPV16型E7抗原CTL表位,采用標準的Fmoc方案合成多肽,產(chǎn)物采用RP-HPLC純化、分析,并進行質(zhì)譜分析鑒定;選取湖北五峰縣土家族健康婦女和原發(fā)性宮頸癌各30名并提取外周血DNA,使用按照優(yōu)諾基 HLA-SSO流式熒光微

2、珠基因分型試劑盒進行 HLA分型,篩選出HLA-A*02+健康婦女和 HLA-B*07+宮頸癌患者各5名,采集外周血單個核細胞(PBMCs)用E7肽體外刺激進行免疫學實驗,采用ELISOT技術(shù)檢測IFN-γ斑點形成細胞數(shù)(Spots Forming Cells,SFCs)水平的差異并進行統(tǒng)計學分析。
　　結(jié)果
　　經(jīng)RP-HPLC純化后,多肽產(chǎn)物純度均在95％以上,采用質(zhì)譜法鑒定出多肽實測分子量與理論值相吻合,鑒定為高純度的

3、目標肽。
　　E7肽體外刺激 HLA-A*02+健康人PBMCs誘導機體產(chǎn)生了顯著的CTLs反應,IFN-γ斑點形成細胞數(shù)目明顯。組間差異用方差分析,組間差異有統(tǒng)計學意義(F=15.17,P<0.001),兩兩比較進行 LSD檢驗,與陰性對照組比較,實驗組差異均有統(tǒng)計學意義,其中以P2:E741-55、P4:E751-65差異最顯著(P<0.05),二者無顯著性差異。
　　E7肽體外刺激 HLA-B*07+宮頸癌患者 P B

4、MCs未能誘導機體產(chǎn)生顯著的CTLs反應,INF-γ斑點形成細胞數(shù)目少,組間差異用方差分析,組間差異有統(tǒng)計學意義(F=40.26,P<0.001),兩兩比較進行LS D檢驗,與陰性對照組比較,以P5:E766-80差異最顯著,且有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　HLA-A*02+健康人與HLA-B*07+宮頸癌患者ELISPOT結(jié)果提示INF-r斑點形成細胞數(shù)目有明顯差異,且差異性有統(tǒng)計學意義(F=268.82,P<0.001)

5、。
　　對不同多肽誘導機體產(chǎn)生 CTLs反應結(jié)果進行 SNK檢驗,P2:E741-55、P4:E751-65和P5:E766-80三條多肽對結(jié)果的影響最明顯,與其他多肽比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),但三者間尚不能認為有統(tǒng)計學差異。
　　結(jié)論:
　　HLA-A*02能有效呈遞HPV16型E7抗原肽誘導機體產(chǎn)生顯著性C TLs反應;HLA-B*07不能有效呈遞HPV16型E7抗原肽誘導機體產(chǎn)生顯著性CTLs反應;E