以活化Qa-1限制性CD8+T細(xì)胞介導(dǎo)的調(diào)節(jié)通路為手段建立獲得性特異性持久性移植免疫耐受.pdf

1、臨床移植免疫學(xué)領(lǐng)域中一個(gè)不可回避的挑戰(zhàn)是，如何在避免長(zhǎng)期使用非特異性免疫抑制手段的前提下建立對(duì)供體特異性的免疫耐受，以達(dá)到對(duì)移植器官慢性排斥反應(yīng)的有效控制。以原創(chuàng)性“外周T細(xì)胞調(diào)節(jié)親合力模式”的理論為基礎(chǔ)，我們提出了一個(gè)建立供體特異性、持久性免疫耐受的創(chuàng)新途徑：即，從生物學(xué)角度把一個(gè)同種移植抗原“轉(zhuǎn)換”成自身抗原，從而使受體免疫系統(tǒng)視同種移植物為自身組織/器官而自然對(duì)其產(chǎn)生耐受?！坝H合力模式”的核心概念是：免疫系統(tǒng)不是以識(shí)別自身或外來(lái)抗

2、原結(jié)構(gòu)上的不同，而是依據(jù)對(duì)兩者起免疫反應(yīng)的 T細(xì)胞群體親合力組合的不同，來(lái)達(dá)到外周“分辨自我和非我”的目的。因此，根據(jù)“親合力模式”的原理，如果能夠首先選擇性清除引起急性排斥反應(yīng)的抗供體同種抗原的T細(xì)胞群體的高親合力部分，并隨后在體內(nèi)重新活化Qa-1/HLA-E限制性CD8+T調(diào)節(jié)細(xì)胞，就可以有效控制引起慢性排斥的抗供體同種抗原的中等親合力T細(xì)胞部分，從而獲得特異性持久性移植耐受。
　　在本研究中，我們?cè)?C57BL/6小鼠與BA

3、LB/c小鼠間建立了成年小鼠皮膚移植耐受(ATT)模型。在此模型中，我們通過(guò) DST（供體淋巴細(xì)胞輸注）聯(lián)合MR-1（抗CD40L抗體）的方法清除了C57BL/6小鼠體內(nèi)引起急性排斥反應(yīng)的、高親合力的、抗供體同種抗原的 T細(xì)胞。該模型鼠的移植皮瓣能夠安全渡過(guò)急性排斥反應(yīng)而進(jìn)入慢性排斥階段，其中位生存時(shí)間（MST)從自然排斥的9~11天延長(zhǎng)至75天。由于缺失了高親合力部分，DST/MR-1誘導(dǎo)的移植耐受小鼠（DMT mice）體內(nèi)抗供體的

4、T細(xì)胞群體的親合力組合只有中、低親合力部分，模擬了天然抗自身抗原的 T細(xì)胞群體親合力的組合。隨后，我們用荷 Hsp60sp的自身樹(shù)突狀細(xì)胞為疫苗（DC/Hsp60sp）免疫DMT小鼠，結(jié)果移植皮瓣存活時(shí)間明顯延長(zhǎng)，其MST達(dá)到160天，并且在20只DC/Hsp60sp免疫的小鼠中有3只獲得了永久耐受（移植皮瓣生存時(shí)間＞300天）。但荷 Qdm的樹(shù)突狀細(xì)胞疫苗和荷Hsp60sp的Qa-1 KO的樹(shù)突狀細(xì)胞疫苗沒(méi)有延長(zhǎng)DMT小鼠移植皮瓣的存

5、活時(shí)間。
　　為直接驗(yàn)證以上 DC/Hsp60sp疫苗對(duì)慢性排斥反應(yīng)的有效控制是否由 Qa-1限制性CD8+T調(diào)節(jié)細(xì)胞所介導(dǎo)，我們把從DC/Hsp60sp疫苗免疫的DMT小鼠分離出的CD8+T細(xì)胞過(guò)繼轉(zhuǎn)輸給未經(jīng)免疫的DMT小鼠，發(fā)現(xiàn)這些CD8+T細(xì)胞能夠有效延長(zhǎng)移植皮瓣的存活時(shí)間（MST138天），但從DC/Hsp60sp疫苗免疫的Qa-1 KO-DMT小鼠分離出的CD8+T卻無(wú)此延長(zhǎng)作用（MST74天）。這些結(jié)果說(shuō)明DC/Hsp

6、60sp疫苗在體內(nèi)誘導(dǎo)產(chǎn)生了一群Qa-1限制性的CD8+T調(diào)節(jié)細(xì)胞，而這種調(diào)節(jié)細(xì)胞能夠有效控制慢性排斥反應(yīng)。
　　在體外進(jìn)一步檢測(cè)Qa-1限制性CD8+T調(diào)節(jié)細(xì)胞的功能實(shí)驗(yàn)中，我們發(fā)現(xiàn)從DC/Hsp60sp疫苗免疫的小鼠中分離的CD8+T細(xì)胞在體外能夠選擇性抑制小鼠對(duì)自身傳統(tǒng)蛋白質(zhì)抗原MOG35-55的免疫反應(yīng)，同時(shí)也能夠選擇性抑制DMT小鼠中造成慢性排斥的抗供體同種抗原的免疫反應(yīng)；但并不影響DMT小鼠針對(duì)第三方同種抗原的T細(xì)胞增