慢性乙型肝炎抗病毒療效與CD8+T細胞和CD4+T細胞功能活性的關系.pdf

1、目的：
　　乙型肝炎病毒(HBV)感染易慢性化，并可能進一步發(fā)展至肝硬化和原發(fā)性肝癌。目前，已有核苷（酸）類似物和干擾素兩大類藥物應用于CHB治療。本研究主要探討應用兩類藥物治療CHB的療效及其與相關免疫細胞活性關系，主要內容包括：
　　1.采用干擾素（peg-IFNα或普通IFNα）及恩替卡韋分別治療兩組慢性乙型肝炎e抗原陽性患者，觀察抗病毒治療效果；
　　2.比較患者在不同抗病毒方案治療過程中，外周血CD8+T淋巴

2、細胞頻率及功能變化，探討其與CHB患者抗病毒療效的關系；
　　3.比較患者在不同抗病毒方案治療過程中，外周血CD4+T淋巴細胞頻率及功能變化，探討其與CHB患者抗病毒療效的關系。
　　方法：
　　1.36例慢性乙型肝炎患者（要求HBeAg陽性），根據(jù)患者意愿并結合醫(yī)生建議分別接受兩種不同的抗病毒治療方案，其中接受干擾素（peg-IFNα或普通IFNα）抗病毒治療的有17例，接受恩替卡韋（核苷類似物）抗病毒治療的有19例

3、。在抗病毒治療前(0周)，抗病毒治療的第4周、12周、24周和48周分別留取5ml血標本，分離PBMC和血清。所有患者均在知情同意下參與本課題的研究。
　　2.患者外周血中HBV DNA載量的檢測通過實時定量熒光PCR(Real time-PCR)定量檢測完成。肝功能九項指標由雅培全自動生化儀檢測完成。HBV標志物五項指標，即乙肝表面抗原(HBsAg）及乙肝表面抗體HBsAb)；e抗原（HBeAg）及e抗體(HBeAb)；核心抗體

4、(HBcAb)的定量檢測通過采用TRFIA（時間分辨熒光免疫定量技術）定量檢測完成。
　　3.運用流式細胞術檢測外周血中CD8+T細胞和CD4+T細胞測細胞頻率及其分泌細胞因子的水平。
　　4.臨床資料分析：我們根據(jù)治療第48W的病毒學應答情況，將所有接受抗病毒治療的患者分為A、B兩組，其中A組為病毒學應答組（干擾組：HBV-DNA<1×104患者；恩替卡韋組HBV-DNA<5×102患者）；B組為非病毒學應答組（干擾組：H

5、BV-DNA>1×104患者；恩替卡韋組HBV-DNA>5×102患者），以下皆同。
　　5.采用Flowjo Software對流式圖原始圖進行處理，應用GraphPad Prism軟件作圖，并應用SPSS軟件（版本為19.0）對實驗相關數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，當p值<0.05時，認為有顯著差異性。
　　結果：
　　1.ETV和IFN兩種抗病毒方案抗病毒效果有一定差異，ETV組治療各時間點ALT水平和HBV DNA載量都低

6、于IFN組。ETV組病毒轉陰率均顯著高于IFN組（p<0.05)，在治療48周IFN組和ETV組病毒轉陰率分別為24％、84%；IFN組HBeAg水平呈下降趨勢，在第48W，IFN組e抗原轉陰率顯著高于ETV組（p<0.05)，分別為29%、0%；e抗原血清學轉換率分別為23%、0%，二者間有統(tǒng)計學差異。
　　2.CHB患者抗病毒前CD8+T細胞和CD4+T細胞頻率及其細胞因子分泌水平
　　PBMC中CD3+CD4+T細胞頻

7、率顯著低于健康對照組（P<0.05)，而CD3+CD8+T細胞頻率與健康對照組相比無明顯差異性。CHB患者CD8+T細胞分泌TNFα的水平高于健康對照組，差異有統(tǒng)計學意義（p<0.05）；其IL-2分泌水平低于健康對照組，差異有統(tǒng)計學意義（p<0.05）；而IFNγ分泌水平與健康對照組無明顯差別。CHB患者CD4+T細胞分泌IFNγ的水平高于健康對照組，差異有統(tǒng)計學意義（p<0.05）；其IL-2分泌水平低于健康對照組，差異有統(tǒng)計學意義

8、（p<0.05）；而TNFα分泌水平與健康對照組無明顯差別。
　　慢性HBV感染者CD8+T細胞頻率與ALT水平無明顯相關性，CD8+T細胞分泌細胞因子IFN-γ、TNF-α與ALT水平呈正相關，而細胞因子IL-2與ALT水平無明顯相關性；CD4+T細胞細胞頻率和細胞因子分泌水平與ALT水平無明顯相關性；病毒載量的高低與CD8+T細胞和CD4+T細胞因子分泌水平均無明顯相關性。
　　3.干擾素及恩替卡韋治療對CD8+T細胞和

9、CD4+T細胞活性的影響
　　治療過程中，IFN組和ETV組CD8+T細胞頻率整體呈下降趨勢，但是與治療前相比，兩組病人CD8+T細胞頻率的變化無統(tǒng)計學意義。IFN組，CHB患者CD8+T細胞分泌的IFNγ先下降后上升，但變化無統(tǒng)計學意義；ETV組則先上升后下降，并且在24W的IFNγ水平低于4W。兩組患者CD8+T細胞分泌的TNFα無明顯變化。兩組患者CD8+T細胞分泌的IL-2水平均呈現(xiàn)上升趨勢，但是與治療前相比，均無統(tǒng)計學差

10、異。
　　治療過程中，兩組患者CD4+T細胞頻率均呈先下降后上升趨勢，但是治療后各時間點與治療前相比，差異無統(tǒng)計學意義。兩組患者CD4+T細胞分泌的IFNγ、TNFα水平的變化均無統(tǒng)計學意義。兩組患者CD4+T細胞分泌的IL-2水平均呈現(xiàn)出上升趨勢，IFN組在治療的24W的IL-2水平高于治療前（p<0.05），而ETV組治療后各時間點與治療前相比，變化無統(tǒng)計學意義。
　　4.抗病毒療效與CD8+T細胞活性的關系
　　

11、全部患者中，A組患者CD8+T細胞分泌的IFNγ水平先下降后上升，而B組則表現(xiàn)出下降趨勢，但是A、B組治療前后變化無統(tǒng)計學意義，且兩組之間的差異無統(tǒng)計學意義。ETV組中，A組呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，但變化無統(tǒng)計學意義；A、B兩組分泌IFNγ水平的變化無明顯差異。IFN組中，A組治療過程中呈先下將后上升趨勢，而B組則呈下降趨勢，且在治療的第24W、48W，A組IFNγ水平顯著高于B組（p<0.05）。
　　全部患者中，A組CD8+T

12、細胞分泌TNFα呈下降趨勢，但變化無統(tǒng)計學意義。而在ETV和IFN組中，A、B兩組治療過程中TNFα分泌水平變化無統(tǒng)計學意義，且A、B兩組間的差異無統(tǒng)計學意義。
　　全部患者和ETV組中，A、B兩組CD8+T細胞分泌IL-2的水平呈現(xiàn)上升趨勢，但是與治療前相比無明顯差異，且A、B兩組間差異無統(tǒng)計學意義。IFN組中，A組CD8+T細胞分泌IL-2的水平呈上升趨勢，且在治療的第24W、48W，A組IL-2水平顯著高于B組（p<0.05

13、），并且在第48W高于治療前。
　　5.抗病毒療效與CD4+T細胞活性的關系
　　在全部患者和ETV組中，A組CD4+T細胞IFNγ分泌水平先升高后下降，A、B兩組治療過程中IFNγ的分泌水平變化無明顯差異，且A、B組之間的差異無統(tǒng)計學意義。在IFN組中，A組治療過程中IFNγ呈上升趨勢，并且在治療的第24W和48W， A組IFNγ的水平顯著高于B組，但是與治療前相比無明顯差異。
　　全部患者、ETV組、IFN組中，A

14、、B兩組治療過程中CD4+T細胞TNFα分泌水平的變化無明顯差異，且A、B兩組之間無明顯差異。
　　在全部患者中，A、B兩組患者治療過程中IL-2的分泌水平均呈現(xiàn)上升趨勢，但與治療前相比并無統(tǒng)計學意義，在治療的第24W，A組顯著高于B組（p<0.05）。在ETV組，A、B兩組的變化無統(tǒng)計學意義。在IFN組中，A組IL-2分泌水平呈上升趨勢，且在12W、24W顯著高于治療前水平（p<0.05),而A組在治療的12W和24W， IL-

15、2分泌水平顯著高于B組（P<0.05)。
　　結論：
　　1.ETV和IFN抗病毒療效：ETV組病毒轉陰率和肝功能復常率高于IFN組，但是ETV組e抗原轉陰率/e抗原血清轉換率均低于IFN組。
　　2.與健康對照組相比，CHB患者CD8+T分泌TNFα分泌水平顯著增高、IL-2的分泌水平顯著降低；CD4+T細胞頻率及其分泌的IL-2水平顯著降低，而IFNγ的分泌水平顯著升高。
　　3.治療過程中，ETV組中，CD