Tim-3表達(dá)對(duì)慢性乙肝患者外周血CD8+T細(xì)胞功能的影響.pdf

1、目的：1.明確慢性乙型肝炎患者外周血CD8+T細(xì)胞Tim-3的表達(dá)及臨床意義。
　　2.明確Tim-3表達(dá)對(duì)慢性乙型肝炎患者外周血總CD8+T細(xì)胞及HBV特異性CD8+T細(xì)胞功能的影響。
　　方法：1.實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)測(cè)定血清HBVDNA水平。
　　2.時(shí)間分辨熒光免疫法測(cè)定HBV感染病毒標(biāo)志物。
　　3.全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)肝功能ALT、TBIL等。
　　4.HBV特異性CD8+T細(xì)胞擴(kuò)增：CHB患

2、者外周血PBMCs分離，加入工作濃度為1mg/ml HBcAg18-27多肽1μl于48孔板各培養(yǎng)孔，37℃5％ CO2孵箱中孵育，第四天加入細(xì)胞因子IL-2維持細(xì)胞增殖10天。
　　5.流式細(xì)胞技術(shù)：a.檢測(cè)CHB患者外周血PBMCs中HLA-A2陽(yáng)性型別；b.檢測(cè)CHB患者外周血PBMCs中CD8+T細(xì)胞Tim-3、CD57及IFN-γ表達(dá)；C.以Tim-3mAb阻斷Tim-3/Tim-3L通路后，檢測(cè)Core18-27Pen

3、tamer+CD8+T細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒功能的改變。
　　6.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)：以Tim-3mAb阻斷Tim-3/Tim-3L通路后，ELISA檢測(cè)培養(yǎng)上清細(xì)胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-2的表達(dá)。
　　結(jié)果：1.CHB患者外周血CD8+T細(xì)胞Tim-3表達(dá)水平顯著高于健康人(F=33.41，P<0.01)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)CHB患者外周Tim-3+CD8+T細(xì)胞CD57表達(dá)水平顯著高于Tim-3-CD8+T細(xì)胞(P<0.

4、05)，并且Tim-3表達(dá)水平與CD57水平呈正相關(guān)(r＝0.41，P<0.05)。
　　2.CHB患者外周血Tim-3+CD8+T細(xì)胞IFN-γ表達(dá)水平顯著低于Tim-3-CD8+T細(xì)胞IFN-γ水平(P<0.01)，并且Tim-3表達(dá)與IFN-γ水平呈負(fù)相關(guān)(r=0.55，P<0.01)。
　　3.CHB患者外周血PBMCs中Tim-3mAb阻斷組core18-27Pentamer+CD8+T細(xì)胞頻數(shù)顯著高于Tim-3m

5、Ab未阻斷組(t=2.29，P<0.05)。
　　4.CHB患者外周血PBMCs中Tim-3mAb阻斷組Pentamer+CD8+T細(xì)胞perforin和CD107a表達(dá)水平明顯高于Tim-3mAb未阻斷組(t=2.87，P<0.05)。
　　5.CHB患者外周血PBMCs中Tim-3mAb阻斷組分泌細(xì)胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-2顯著高于Tim-3mAb未阻斷組(t值分別為2.62、2.30和2.61，P<0.05

6、)。
　　結(jié)論：1.CHB患者外周血CD8+T細(xì)胞高表達(dá)Tim-3，與肝臟炎癥水平成正相關(guān)。
　　2.CHB患者外周血表達(dá)Tim-3的CD8+T細(xì)胞表型老化，生成IFN-γ能力下降。
　　3.以Tim-3mAb阻斷Tim-3通路，CHB患者PBMCs中Pentamer+CD8+T細(xì)胞數(shù)量增多。
　　4.以Tim-3mAb阻斷Tim-3通路，能提高CHB患者PBMCs中Pentamer+CD8+T細(xì)胞CD107a和