膿毒癥后CD8+T細(xì)胞高表達(dá)Tim-3誘發(fā)免疫紊亂.pdf

1、目的：
　　膿毒癥是指多致病因素引起的各組織、器官的過度炎癥反應(yīng)，可以繼發(fā)嚴(yán)重的感染或伴有難治性休克。從長時(shí)間的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)來看，嚴(yán)重感染的和伴有難治性休克的患者是重度、復(fù)雜的創(chuàng)傷人群主要的死亡原因之一。該疾病的發(fā)展前期人體會(huì)大量分泌炎性細(xì)胞因子，繼續(xù)發(fā)展變化則發(fā)生免疫抑制、紊亂，誘發(fā)大部分免疫相關(guān)的生物分子程序性死亡。Tim-3是T細(xì)胞免疫球蛋白黏蛋白家族中的一個(gè)，對(duì)機(jī)體的免疫應(yīng)答反應(yīng)具有抑制調(diào)節(jié)作用，可以調(diào)控T細(xì)胞的凋亡和免疫耐受

2、；最早在小鼠的CD4+Th1細(xì)胞表面發(fā)現(xiàn)該蛋白，并具有特異性；其在固有免疫和適應(yīng)性免疫反應(yīng)中發(fā)揮著重大功能。CD8+T人體內(nèi)的一個(gè)亞淋巴細(xì)胞群，其主要參與調(diào)節(jié)清除病毒感染的細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞。但是目前關(guān)于CD8+T和Tim-3在膿毒癥誘導(dǎo)的免疫紊亂中所起作用的研究還較少。因此，本課題觀察了 Tim-3在膿毒癥小鼠脾臟 CD8+T及膿毒癥患者外周血中CD8+T細(xì)胞表面的表達(dá)情況，膿毒癥后CD8+T數(shù)量改變與Tim-3表達(dá)間的關(guān)系；CD8+T功

3、能的變化與Tim-3表達(dá)間的相互關(guān)系。
　　方法：
　　1、采集膿毒癥病人的血液作為實(shí)驗(yàn)標(biāo)本，健康成人的血液作為對(duì)照實(shí)驗(yàn)標(biāo)本；通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)膿毒癥病人靜脈血CD8+ T細(xì)胞Tim-3表達(dá)情況；
　　2、建立膿毒癥傳統(tǒng)的小鼠模型——盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)(CLP)，對(duì)照組采用假手術(shù)處理，其僅予以麻醉及開腹并予以關(guān)閉腹腔，對(duì)盲腸不予以結(jié)扎及穿孔。并于CLP術(shù)后2h、6h、12h、24h、36h及48h獲取小鼠脾臟，通過流式細(xì)胞

4、術(shù)檢測(cè)膿毒癥小鼠及假手術(shù)組小鼠脾臟CD8+ T細(xì)胞Tim-3表達(dá)情況及Tim-3+CD8+T和Tim-3-CD8+T細(xì)胞功能狀態(tài)。
　　結(jié)果:
　　一、膿毒癥后CD8+T細(xì)胞數(shù)量改變與Tim-3表達(dá)之間的關(guān)系：
　　A、膿毒癥后12小時(shí)開始，CLP組小鼠的脾臟CD8+T細(xì)胞總數(shù)顯著低于對(duì)照組（假手術(shù)組）的小鼠。
　　B、膿毒癥后24小時(shí)，CLP組小鼠的脾臟CD8+T細(xì)胞的凋亡顯著高于對(duì)照組（假手術(shù)組）的小鼠。

5、r>　　C、1、CLP組小鼠的脾臟CD8+T表達(dá)Tim-3蛋白顯著高于對(duì)照組（假手術(shù)組）。
　　2、Tim-3+CD8+T細(xì)胞亞群的凋亡發(fā)生率顯著高于Tim-3-CD8+T細(xì)胞亞群。
　　D、膿毒癥后24小時(shí)CD8+T表達(dá)Tim-3蛋白與其自身的凋亡成正相關(guān)。
　　二、膿毒癥后CD8+T細(xì)胞的功能改變及與Tim-3表達(dá)間的關(guān)系：
　　A、Tim-3+CD8+T細(xì)胞趨向于分泌更少的Th1細(xì)胞因子（IFN-γ，IL-

6、2,TNF-α）
　　B、Tim-3+CD8+T細(xì)胞趨向于分泌更多的抑炎因子（IL-10）。
　　C、膿毒癥后Tim-3+CD8+T細(xì)胞趨向于表達(dá)更多的死亡蛋白PD-1。
　　三、膿毒癥患者外周血CD8+ T細(xì)胞表達(dá)Tim-3的比例較健康對(duì)照組增高。
　　結(jié)論：
　　膿毒癥后患者外周血CD8+T細(xì)胞及盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)(CLP)小鼠的脾臟CD8+T細(xì)胞12小時(shí)起細(xì)胞總數(shù)顯著降低，24小時(shí)起細(xì)胞凋亡增多，表達(dá)的T