Tim-3在肝細(xì)胞性肝癌中的表達(dá)及意義.pdf

1、背景與目的:
　　原發(fā)性肝癌(primary liver cancer)是臨床常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,目前在世界范圍內(nèi)其發(fā)病率位居于惡性腫瘤中的第五位,而其死亡率位居第三位。全世界每年約有75萬(wàn)例肝癌新確診病例,70萬(wàn)例死亡病例,其中約有一半發(fā)生在中國(guó)。肝細(xì)胞性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)作為最主要的組織學(xué)亞型占原發(fā)性肝癌的70-85％。約有78%的HCC是源于HBV(53%)或HCV(25%)所致

2、的慢性感染。近年來(lái)肝癌的治療研究取得了較大的進(jìn)展,但因?yàn)槠涓咿D(zhuǎn)移率和高復(fù)發(fā)率的特性,總體預(yù)后仍然不樂(lè)觀。腫瘤的生物學(xué)特性是影響預(yù)后的最根本因素,而癌的轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)恰是癌生物學(xué)特性最集中的表現(xiàn)。因而,對(duì)肝癌細(xì)胞增殖、侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)領(lǐng)域的實(shí)驗(yàn)研究不但具有重要的理論意義,而且具有重要的科研和臨床應(yīng)用價(jià)值。
　　T細(xì)胞免疫球蛋白及粘蛋白分子3(T cell immunoglobulin and mucin domain3,Tim-3)最早被發(fā)現(xiàn)

3、其表達(dá)于終末分化的Thl細(xì)胞上,是區(qū)分Thl和Th2細(xì)胞的表面標(biāo)志。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)在CD8T細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cell,Treg)、Th17、樹(shù)突狀細(xì)胞(dendritic cells,DC)、自然殺傷細(xì)胞(natural killer cell,NK)、巨噬細(xì)胞、肥大細(xì)胞和其他淋巴細(xì)胞亞群都存在Tim-3的表達(dá),并對(duì)細(xì)胞因子分泌起著重要的調(diào)節(jié)作用,從而在多細(xì)胞水平上參與腫瘤免疫。目前的研究證明Tim-3的表

4、達(dá)與腫瘤相關(guān)的免疫抑制顯著相關(guān)。近來(lái),Tim-3被發(fā)現(xiàn)反常表達(dá)于黑色素瘤細(xì)胞,并使腫瘤細(xì)胞粘附力降低,促進(jìn)腫瘤進(jìn)展。Zhuang等也發(fā)現(xiàn)tim-3高表達(dá)于非小細(xì)胞肺癌,且這種表達(dá)是患者的獨(dú)立預(yù)后因素。但Tim-3與HCC的關(guān)系報(bào)道較少,尚需進(jìn)一步研究。
　　本課題旨在研究探討Tim-3在HCC組織中的表達(dá),分析其與患者臨床病理特征的關(guān)系,探尋其臨床意義;并深入研究Tim-3在HCC中的表達(dá)及其對(duì)腫瘤進(jìn)展的作用。有助于闡明Tim-3

5、在肝癌診斷、治療、預(yù)后判斷中的應(yīng)用價(jià)值。
　　方法:
　　1.標(biāo)本收集:
　　收集2012年10月至2013年8月臨床手術(shù)切除的肝細(xì)胞肝癌組織標(biāo)本20例,包括癌組織及對(duì)應(yīng)癌旁組織;手術(shù)切除的血管瘤或肝外傷切除的正常肝臟組織標(biāo)本4例。實(shí)驗(yàn)室凍存的肝癌細(xì)胞株2組(HepG2、SMMC7721),人正常肝細(xì)胞系1組(LO2)。
　　2.Tim-3在HCC中的表達(dá)檢測(cè):
　　(1)采用熒光實(shí)時(shí)定量PCR(Real-

6、time fluorescent quantitive polymerase chain
　　reaction,Real-time PCR)和蛋白質(zhì)印跡(Western blot)方法檢測(cè)Tim-3在20例肝癌組織、對(duì)應(yīng)癌旁組織及4例正常肝臟組織中的表達(dá)。對(duì)比其在上述組織間的表達(dá)差異;分析Tim-3在肝癌組織中的表達(dá)情況與患者臨床病理學(xué)特征的相關(guān)性。
　　(2)采用Real-time PCR和Western blot方法分別

7、從mRNA水平和蛋白質(zhì)水平檢測(cè)肝癌細(xì)胞株HepG2、SMMC7721與人正常肝細(xì)胞株LO2中Tim-3的表達(dá)情況,并選取表達(dá)最顯著的細(xì)胞株進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。
　　3.Tim-3與肝癌細(xì)胞的增殖、遷移等生物學(xué)特性的關(guān)系研究:
　　應(yīng)用RNA干擾技術(shù)轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞株下調(diào)Tim-3的表達(dá),采用MTT實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Tim-3對(duì)肝癌細(xì)胞增殖、遷移能力的影響。
　　結(jié)果:
　　1.肝細(xì)胞性肝癌組織中Tim-3的表達(dá)明顯高

8、于癌旁組織及正常肝組織,肝癌組織中Tim-3的表達(dá)與腫瘤病理分級(jí)、門(mén)靜脈癌栓存在相關(guān)性,在患者不同年齡、性別、AFP、HBV感染、肝硬化、腫瘤大小、腫瘤數(shù)目、Child-Pugh分級(jí)、TNM分期等的表達(dá)無(wú)差異性。
　　2.人HCC細(xì)胞株HepG2、SMMC7721中Tim-3 mRNA和蛋白的表達(dá)均較正常肝細(xì)胞株L02明顯增高。轉(zhuǎn)染Tim-3 siRNA后,肝癌細(xì)胞株HepG2中Tim-3蛋白水平表達(dá)明顯降低。與對(duì)照組比較,細(xì)胞的