中國林蛙蛙頭提取物中抗凝血活性物質(zhì)的研究.pdf

1、中國林蛙(RanaChensinensis)，俗稱田雞，蛤士蟆，屬兩棲綱，無尾目蛙科，是我國特有的經(jīng)濟(jì)價值很高的藥用兩棲動物。它在我國許多地區(qū)都能生存，但主要分布在東北三省。中國林蛙渾身都是寶，具有較高的藥用價值和經(jīng)濟(jì)價值，目前國內(nèi)關(guān)于中國林蛙的利用多為雌蛙的制藥及蛙肉的食用等傳統(tǒng)的研究范疇，有關(guān)中國林蛙深加工的報道很少。本文旨是從林蛙頭中分離出具有抗凝血活性的提取物，為大幅度提高林蛙產(chǎn)品的附加值，實(shí)現(xiàn)其綜合利用開辟一條新的途徑。

2、 首先，實(shí)驗以中國林蛙的蛙頭為原料，經(jīng)過剪切，勻漿，堿解，去蛋白，干燥等處理后得到一種有抗凝血活性的提取物，并以L9(34)正交實(shí)驗設(shè)計優(yōu)化選出抗凝血提取物的最佳提取工藝是勻漿時加入的生理鹽水的量為林蛙頭體積的2倍，堿解時的時間為8h，堿解時加入堿液的體積為原液的5倍，堿解時的溫度為30℃。并在此條件下進(jìn)行了中試實(shí)驗，結(jié)果表明此放大中試試驗是完全可行的，可以用于工業(yè)化生產(chǎn)。 其次，對林蛙頭提取物進(jìn)行了抗凝血活性研究，結(jié)果顯示林

3、蛙頭提取物在體外能延長凝血時間，復(fù)鈣凝血時間，凝血酶原時間，凝血酶時間，抑制凝血酶活性，并和劑量呈依賴關(guān)系。但沒有水解纖維蛋白的活性和對纖溶酶原激活活性。在體內(nèi)能延長凝血時間和出血時間，但和劑量沒有依賴關(guān)系。并對林蛙頭提取物進(jìn)行了抗凝血性能的評價，大概有肝素活性的二十分之一，同時用試管血液凝固方法測定了其抗凝血活性的效價為5.2U。 然后，對林蛙頭提取物進(jìn)行了理化性質(zhì)分析。結(jié)果表明，林蛙頭提取物易溶解于水中和稀酸溶液中，尤其易溶

4、于稀堿溶液中，不溶于乙醇，乙醚，乙酸乙酯，丙酮等有機(jī)溶劑。林蛙頭提取物熱穩(wěn)定性較好。在強(qiáng)酸和強(qiáng)堿下活性降低。由組分測定可知，林蛙頭提取物中含有多糖，蛋白，氨基酸，氨基己糖，半乳糖醛酸，硫酸根等物質(zhì)，是一種蛋白聚糖復(fù)合物。本實(shí)驗也確定了林蛙頭提取物的抗凝的有效成分是蛋白和多糖。林蛙頭提取物可能是一種氨基多糖，是類肝素類物質(zhì)。 最后，也對林蛙頭提取物的抗凝血機(jī)制進(jìn)行了初步的探索，研究結(jié)果表明，林蛙頭提取物是通過抑制血漿中的凝血因子Ⅱ

5、，Ⅶ，Ⅹ的活性來達(dá)到抗凝血作用的。林蛙頭提取物的抗凝作用作用機(jī)制和肝素相似，推測林蛙頭提取物是類肝素物質(zhì)。 在以上研究結(jié)果的基礎(chǔ)上，本研究得出結(jié)論：林蛙頭提取物是一種蛋白聚糖，實(shí)驗室提取工藝適合工業(yè)化大生產(chǎn)，它在體內(nèi)體外均有抗凝血作用，但沒有溶栓作用?？鼓鼓r為5.2，在凝血過程中能抑制凝血因子Ⅱ，Ⅶ，Ⅹ的活性，作用機(jī)制和肝素相似，推測是一種類肝素類物質(zhì)。 本實(shí)驗為林蛙頭進(jìn)一步開發(fā)成抗凝血的天然保健品奠定了一定的科