肝細胞生長因子(HGF)對體外培養(yǎng)的人退變髓核細胞生物學活性的影響.pdf

1、背景：
　　 椎間盤退變(intervertebral disc degeneration，IVD)是椎間盤突出、椎體滑脫、椎管狹窄等脊柱疾病的首要病因。研究證實，占椎間盤體積1％的髓核細胞在維持正常椎間盤細胞和細胞外基質平衡以及在修復退變的椎間盤過程中發(fā)揮著核心作用。肝細胞生長因子（hepatocyte growth factor，HGF）是人體中重要的細胞因子，存在于多種組織與細胞，發(fā)揮促進細胞增殖、基質表達、血管新生、抑制

2、細胞凋亡等作用，在生命的器官發(fā)生、形態(tài)形成、個體發(fā)育以及組織修復中發(fā)揮作用。通過肝細胞生長因子對髓核細胞作用，研究髓核細胞增殖活性以及細胞外基質表達變化，為修復退變的椎間盤尋求切實可靠的方法。
　　 目的：
　　 1.探討肝細胞生長因子(HGF)對體外培養(yǎng)的人退變髓核細胞的生物學作用。
　　 2.研究肝細胞生長因子與胰島素樣生長因子聯(lián)合作用對人退變髓核細胞的影響。
　　 方法：
　　 收集人退變髓

3、核組織標本，分離培養(yǎng)髓核細胞；免疫組織化學法檢測髓核細胞Ⅱ型膠原表達，HE染色觀察細胞形態(tài)；免疫組化染色觀察HGF受體在髓核細胞中表達；設立HGF:0ng/ml、5ng/ml、50ng/ml、500ng/ml組，采用MTT法測細胞生長曲線，篩選HGF最佳作用濃度；選取第3代髓核細胞，實驗分HGF組、HGF+IGF組、IGF組、對照組，RT-PCR檢測Ⅱ型膠原、蛋白多糖、SOX9 mRNA表達；流式細胞術測定細胞增殖的周期。
　　

4、 結果：
　　 免疫組化Ⅱ型膠原染色可見細胞外和胞漿內(nèi)棕褐色顆粒；HE染色細胞核染成紫色；免疫組化顯示髓核細胞表達HGF受體；MTT法提示不同濃度肝細胞生長因子對體外培養(yǎng)的人退變髓核細胞均有明顯的促增殖作用，與對照組相比差異均有意義,50ng/ml是實驗中肝細胞生長因子的最佳作用濃度；HGF、HGF+IGF、IGF刺激后髓核細胞進入增殖期比例增加，同時促進髓核細胞Ⅱ型膠原、蛋白多糖、SOX9mRNA表達量增加，其中HGF+IGF