蛋白酶體抑制劑MG132促進(jìn)順鉑誘導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌凋亡機(jī)制的研究.pdf

1、背景：
　　當(dāng)今社會(huì)迅速發(fā)展，而生活環(huán)境卻日益惡化，惡化的環(huán)境是惡性腫瘤發(fā)生的重要誘因之一。研究表明惡性腫瘤是目前全球發(fā)病率和死亡率最高的疾病之一，而近些年肺癌的發(fā)病率已躍居惡性腫瘤的首位，因此如何有效地治療肺癌引起大家的重視。肺癌的治療已進(jìn)入手術(shù)、化療、放療、生物治療、靶向治療等聯(lián)合治療的新階段，雖然手術(shù)切除腫瘤仍是目前最主要和最有效的治療方法。但是由于早期肺癌患者并無明顯的臨床癥狀，延誤了早起發(fā)現(xiàn)的時(shí)機(jī)?；颊叱霈F(xiàn)癥狀后再來醫(yī)院

2、就診，約有50％-60％的患者已處于肺癌晚期(Ⅲ/Ⅳ)，而此時(shí)已經(jīng)失去最佳的手術(shù)時(shí)機(jī)。因而對(duì)于晚期肺癌患者，化療、放療對(duì)其治療占有重要的地位。由于化療藥物被廣泛地使用在對(duì)肺癌的治療，化療藥物的毒副作用以及腫瘤對(duì)化療藥物的耐藥性已成為臨床工作者難以克服的障礙。癌癥的發(fā)生主要是由于細(xì)胞的DNA發(fā)生了基因水平的突變。因此腫瘤在化療后復(fù)發(fā)，基因水平的突變?cè)斐闪藢?duì)化療藥物的多重耐藥性。因此，尋找減小腫瘤對(duì)化療藥物的耐藥性，提高化療藥物作用，毒副作

3、用小的新的作用靶點(diǎn)已成為當(dāng)今醫(yī)學(xué)界探討和研究的熱點(diǎn)。蛋白酶體是近些年研究的熱點(diǎn)，蛋白酶體廣泛存在真核細(xì)胞中，可選擇性降解細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)，而蛋白酶體可以調(diào)控各種細(xì)胞過程，如蛋白質(zhì)的加工和更新、細(xì)胞周期、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞分化和細(xì)胞凋亡等。蛋白酶體抑制劑可以通過阻斷蛋白酶體通路從而抑制蛋白質(zhì)的降解，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。因此蛋白酶體抑制劑可以抑制腫瘤細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)的降解，調(diào)節(jié)細(xì)胞周期，抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡。而蛋白酶體抑制劑與化療藥物

4、聯(lián)合作用于腫瘤細(xì)胞，蛋白酶體抑制劑能否提高化療藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用，提高腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性，本方面的研究較少。因此本研究通過蛋白酶體抑制劑與順鉑聯(lián)合應(yīng)用誘導(dǎo)肺癌A549發(fā)生凋亡，來分析蛋白酶體抑制劑對(duì)細(xì)胞凋亡的影響，為減小化療藥物的耐藥性，提高腫瘤對(duì)化療藥物的敏感性提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　目的：
　　通過蛋白酶體抑制劑三肽基乙醛(MG132)聯(lián)合順鉑(DDP)來探討誘導(dǎo)肺癌A549細(xì)胞凋亡的影響，為進(jìn)一步研究腫瘤對(duì)

5、化療藥物的敏感性，提高化療療效提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　采用細(xì)胞計(jì)數(shù)盒(CCK-8)法檢測(cè)不同分組對(duì)肺癌A549的抑制率;通過采用Hoechst33342染色觀察細(xì)胞的形態(tài)變化及熒光染色陽性細(xì)胞百分比;流式細(xì)胞術(shù)(FCW)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率;采用Westernblot法檢測(cè)細(xì)胞中核轉(zhuǎn)錄因子NF-kB和凋亡相關(guān)蛋白caspase9的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　單用MG132組、單用DDP組細(xì)胞抑制率隨時(shí)間和濃度明

6、顯增加，細(xì)胞核裂解，染色質(zhì)凝集，細(xì)胞凋亡率增加。MG132和DDP聯(lián)合作用組細(xì)胞凋亡率較單用DDP組明顯增加，MG132和DDP聯(lián)合作用組較單用DDP組，核轉(zhuǎn)錄因子NF-kB表達(dá)明顯減少凋亡相關(guān)蛋白caspase9表達(dá)顯著增加。
　　結(jié)論：
　　蛋白酶體抑制劑MG132與DDP聯(lián)合作用促凋亡作用明顯提高，其部分作用機(jī)制可能是蛋白酶體抑制劑MG132抑制腫瘤細(xì)胞中NF-kB的釋放，提高了腫瘤細(xì)胞對(duì)DDP誘導(dǎo)凋亡的敏感性，迸一步