黃芪甲苷抗PC12細(xì)胞氧化損傷作用機制研究.pdf

1、目的：黃芪甲苷（Astragaloside IV，AsIV）具有多種生物學(xué)活性，如抗氧化、清除自由基、抗炎等藥理作用，本研究通過分子生物學(xué)手段探討在應(yīng)用氧化應(yīng)激誘發(fā)的PC12細(xì)胞損傷中，黃芪甲苷發(fā)揮的保護作用及其具體機制。
　　方法：本研究用H2O2作用PC12細(xì)胞建立氧化應(yīng)激損傷模型。采用MTT法觀察AsIV對細(xì)胞活性的影響，同時確定 AsIV的最適保護濃度。通過線粒體腫脹實驗測定 PC12細(xì)胞線粒體吸光度（OD）值的變化以判斷

2、 mPTP的開放程度，進而判斷黃芪甲苷是否通過抑制 PC12細(xì)胞 mPTP的開放，產(chǎn)生細(xì)胞保護作用。通過Western blot法檢測黃芪甲苷對磷酸化-GSK-3β（Ser9）、磷酸化-血管擴張刺激磷蛋白（Vasodilator stimulated phosphoprotion，p-VASP）（Ser239）的改變，探討黃芪甲苷發(fā)揮PC12細(xì)胞保護作用的具體信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制。
　　結(jié)果：1、MTT法對細(xì)胞活性檢測結(jié)果顯示，與空白對照

3、組相比，H2O2（300μmol/L）組吸光度明顯下降至（53.2±3.7％，P<0.05）。不同濃度的AsIV（100、200、400nmol/L）預(yù)處理組與 H2O2組相比，其吸光度下降程度減輕（70.4±5.1%，P<0.05；66.5±6.0%，P<0.05；61.9±3.8%，P<0.05），而以AsIV（100nmol/L）處理組這一作用最為顯著（70.4±5.1%，P<0.05）。提示一定濃度的AsIV可以減輕氧化應(yīng)激所引

4、起的PC12細(xì)胞損傷，且100nmol/L AsIV的保護作用最強。2、線粒體腫脹實驗結(jié)果顯示，與空白對照組比較，H2O2（300μmol/L）組吸光度（OD）減少值明顯增加（0.01380±0.00264，P<0.05）。與 H2O2組比較，100nmol/L AsIV預(yù)處理組能夠減輕 H2O2導(dǎo)致的線粒體腫脹程度（0.01070±0.00250，P<0.05），提示 AsIV可通過抑制 mPTP的開放發(fā)揮保護作用。3、Western

5、 blot顯示，與H2O2組相比，100nmol/L AsIV預(yù)處理后，p-GSK-3β表達增加（131.4±8.3%，P<0.05），并且這種增加作用可以被PKG抑制劑KT5823所阻斷（60.5±6.6%，P<0.05），進一步的結(jié)果顯示，與空白對照組相比，黃芪甲苷（100nmol/L）組能夠使 VASP（Ser239）的磷酸化明顯增加（116.0±7.1%，P<0.05），且此作用同樣可被 KT5823所抑制（85.2±7.5%，