單側(cè)輸尿管梗阻大鼠腎臟TGF-β受體亞型表達(dá)的變化.pdf

1、目的：探討轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）Ⅰ型受體、Ⅱ型受體以及下游Smad蛋白在單側(cè)輸尿管梗阻（UUO）大鼠模型腎臟中表達(dá)及意義。 方法：90只雌性Wistar大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組（CON組）、假手術(shù)組（SOR組）和單側(cè)輸尿管梗阻組（UUO組），分別于術(shù)后1d、3d、7d、14d、21d處死，觀察各組大鼠腎功能變化；PAS染色觀察大鼠腎間質(zhì)病理形態(tài)改變；采用定時(shí)定量PCR基因芯片分析正常大鼠和不同分期腎間質(zhì)纖維化大鼠腎組織TG

2、F-βⅠ，Ⅱ型受體亞型表達(dá)，觀察其豐度變化，結(jié)合腎組織的病理改變，篩選出有病理生理意義的TGF-βⅠ，Ⅱ型受體亞型。進(jìn)一步應(yīng)用Real-time PCR，Western blot，和免疫熒光檢測(cè)篩選出的TGF-β受體亞型mRNA和蛋白在腎間質(zhì)纖維化大鼠腎組織的分布和表達(dá)。 結(jié)果：隨時(shí)間延長(zhǎng)，UUO組大鼠的血肌酐，血尿素氮與CON組比較均于術(shù)后第7天出現(xiàn)升高，并隨梗阻時(shí)間延長(zhǎng)逐漸增加，于21天達(dá)到最高峰（P<0．01）。腎組織病理

3、PAS染色可見UUO組腎臟隨梗阻時(shí)間延長(zhǎng)，腎小管萎縮、擴(kuò)張、炎細(xì)胞浸潤(rùn)加重；基因芯片結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比，輸尿管梗阻組腎組織TGF-βⅠ型受體ALK-5、ALK-6、ALK-7、TGF-βⅡ型受體TGFβRⅡ，Smad2/3、p-Smad2/3的mRNA表達(dá)出現(xiàn)顯著變化。Real-time PCR結(jié)果：ALK-5，ALK-7，TGFβRⅡ的mRNA表達(dá)于術(shù)后第3d出現(xiàn)上升并隨梗阻時(shí)間延長(zhǎng)逐漸增加（P<0．05），于14天達(dá)到最高峰（P

4、<0．01），在第21天有所回落。蛋白水平檢測(cè)：ALK-5、ALK-7、TGFBRⅡ蛋白水平表達(dá)與基因水平表達(dá)一致。ALK-6蛋白水平表達(dá)于術(shù)后第3d即出現(xiàn)下降并隨梗阻時(shí)間延長(zhǎng)逐漸減少（P<0．05），于14天達(dá)到最低峰（P<0．01），在第21天有所回升。Smad2/3、p-Smad2/3蛋白表達(dá)于術(shù)后第3d出現(xiàn)上升并隨梗阻時(shí)間延長(zhǎng)逐漸增加（P<0．05），于14天達(dá)到最高峰（P<0.01），在第21天有所回落。免疫熒光結(jié)果顯示ALK

5、-5、ALK-6、ALK-7、TGFBRⅡ蛋白在CON組中主要分布在腎小管及腎間質(zhì)，腎小球內(nèi)基本無表達(dá)。在UUO組，ALK-5、ALK-7、TGFβRⅡ、Smad2/3、TGFβRⅡ蛋白表達(dá)隨著梗阻時(shí)間延長(zhǎng)呈進(jìn)行性上升（P<0.05），于14天達(dá)到最高峰（P<0.01），在第21天有所回落。ALK-6蛋白表達(dá)呈進(jìn)行性下降（P<0.05），于14天達(dá)到最低（P<0.01），在第21天有所回升。 結(jié)論：在腎間質(zhì)纖維化進(jìn)展中TGF-p