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1、目的:觀察四氯化碳(CCl4)致大鼠肝纖維化發(fā)生過程中微小RNA-200家族(miR-200s)成員微小RNA-141(miR-141)在大鼠肝臟的表達(dá)變化,探討miR-141在肝纖維化發(fā)生機(jī)制中可能的作用。
方法:雄性Wistar大鼠64只,隨機(jī)分為正常對(duì)照2周、4周、6周、8周組,肝纖維化2周、4周、6周、8周組。皮下注射60%CCl4制備肝纖維化模型,分別在造模2周、4周、6周、8周末處死大鼠,測(cè)定肝臟指數(shù)、血清谷丙轉(zhuǎn)氨
2、酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)的含量,并觀察肝組織結(jié)構(gòu)改變。采用免疫組化SABC法檢測(cè)正常4周、8周組及相應(yīng)肝纖維化組大鼠肝組織中α平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)的表達(dá)情況。運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real time-PCR)的方法測(cè)定并比較正常4周、8周組及相應(yīng)肝纖維化組大鼠肝組織中E-鈣粘素(E-cadherin)mRNA及各組大鼠肝組織中miR-141的表達(dá)水平。
結(jié)果:造模不同時(shí)間肝纖維化組大鼠肝臟指數(shù)、血清ALT和
3、AST活性均顯著高于相應(yīng)正常對(duì)照組(P<0.01)。病理學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)造模4周開始大鼠肝臟纖維結(jié)締組織明顯增多,且隨時(shí)間增長(zhǎng)纖維化病變逐步加重,在肝纖維化8周組大鼠肝臟中有明顯假小葉形成。免疫組化結(jié)果發(fā)現(xiàn),肝纖維化4周、8周組大鼠肝組織中α-SMA主要表達(dá)在肝細(xì)胞胞漿和纖維間隔組織中,α-SMA陽性表達(dá)量較相應(yīng)正常對(duì)照組顯著增加(P<0.01),且隨肝纖維化發(fā)展明顯增加。Real time-PCR結(jié)果顯示,肝纖維化4周、8周組大鼠肝組織E-
4、cadherin mRNA表達(dá)量顯著低于相應(yīng)正常對(duì)照組(P<0.05),且隨肝纖維化發(fā)展顯著降低。肝纖維化2周組大鼠肝臟miR-141水平明顯高于相應(yīng)正常對(duì)照組(P<0.05);肝纖維化4周組大鼠肝臟miR-141水平較相應(yīng)對(duì)照組明顯降低(P<0.01),且明顯低于肝纖維化2周組(P<0.01);肝纖維化6周組大鼠肝臟miR-141水平又明顯升高,高于相應(yīng)正常對(duì)照組(P<0.01)及肝纖維化4周組(P<0.01),在肝纖維化8周組大鼠的
5、肝組織中miR-141的表達(dá)明顯高于相應(yīng)正常組(P<0.01)及肝纖維化2周、4周、6周組(P<0.01)。
結(jié)論:我們的研究證實(shí)在CCl4誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化發(fā)生過程中有部分肝細(xì)胞發(fā)生了上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT),提示部分肝細(xì)胞發(fā)生了EMT參與了肝纖維化的發(fā)生發(fā)展;肝纖維化發(fā)生過程中大鼠肝臟miR-141的表達(dá)水平有明顯的改變,且隨著肝纖維化程度加深而大體呈逐漸升
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