以iTRAQ技術(shù)研究大鼠肝纖維化發(fā)展為肝癌過程中的關(guān)鍵蛋白.pdf

1、目的:分析肝纖維化-肝癌動物模型中四個時間點肝組織差異表達的蛋白，尋找肝纖維化發(fā)展為肝癌過程中的關(guān)鍵蛋白。
　　方法:利用二乙基亞硝胺建立大鼠肝纖維化-肝癌模型，提取模型大鼠中第4周，第10周，第12周，第18周四個時間點的肝組織蛋白，以正常喂養(yǎng)的大鼠肝組織作為對照組，采用iTRAQ結(jié)合2D-LC-MS/MS定量蛋白質(zhì)組學技術(shù)分析肝組織中差異表達的蛋白質(zhì)。從生物過程、細胞成分注釋、分子功能、信號通路富集、蛋白之間相互作用五大方面對

2、篩選出的差異蛋白進行深層次分析。
　　結(jié)果:質(zhì)譜分析共鑒定到2085個蛋白，各個時間點篩選到的差異表達蛋白為:第4周148個，上調(diào)蛋白61個，下調(diào)蛋白87個;第10周233個，上調(diào)蛋白87個，下調(diào)蛋白146個;第12周72個，上調(diào)蛋白38個，下調(diào)蛋白34個;第18周573個，上調(diào)蛋白210個，下調(diào)蛋白363個。在四個時間點均重復(fù)鑒定到的蛋白有23個，含上調(diào)蛋白有10個，下調(diào)蛋白有13個。GO分析表明，差異表達的蛋白在細胞生物過程功

3、能中主要參與代謝過程、細胞過程、生物學調(diào)節(jié)和細胞信號傳導(dǎo)等過程;在細胞位置中主要附著于細胞器、細胞膜上、細胞外基質(zhì)、突觸、細胞結(jié)合等位置;在分子功能中主要參與催化活性、綁定功能、轉(zhuǎn)運、酶活性調(diào)節(jié)、抗氧化等功能。信號通路富集分析發(fā)現(xiàn)，差異表達的蛋白主要參與氨基酸降解、化學致癌、二羧酸代謝、色氨酸代謝、甾類激素的生物合成、糖酵解等相關(guān)通路。蛋白相互作用分析顯示，處在蛋白互作關(guān)鍵節(jié)點的蛋白有細胞色素P450系3A1、細胞色素P450系2C55

4、、谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶α5、谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶α2、谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶P、增殖細胞核抗原、絲裂原活化蛋白激酶3、α2-HS-糖蛋白、細胞周期依賴性激酶4、α1巨球蛋白、醛糖還原酶和纖維蛋白原等蛋白。
　　結(jié)論:(1)成功構(gòu)建二乙基亞硝胺誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化-肝癌模型，并在造模的四個時間點，從組織病理學上揭示了肝纖維化發(fā)展成為肝癌過程(2)細胞周期依賴性激酶4、α1巨球蛋白、α2-HS-糖蛋白、絲裂原活化蛋白激酶3、羧酸酯酶2c等參與多種生物信號途