應(yīng)用單管PCR擴(kuò)增測(cè)序分型法分析成都漢族HLA-DRB1基因多態(tài)性.pdf

1、研究背景與目的意義:
　　人類主要組織相容性抗原復(fù)合體(MHC)又稱人類白細(xì)胞抗原(HLA),是目前所知最為復(fù)雜的遺傳多態(tài)性系統(tǒng),是調(diào)控人體特異性免疫應(yīng)答和決定疾病易感性個(gè)體差異的主要基因系統(tǒng)。目前在人類學(xué)研究、法醫(yī)學(xué)、免疫學(xué)、器官移植和疾病相關(guān)性研究等領(lǐng)域有廣泛的應(yīng)用。但因?yàn)镠LA具有高度的多態(tài)性,其分布有顯著人種、民族和地理的差別,使得某些基因的頻率在不同種族之間差別很大。因此在研究HLA之前,必須先進(jìn)行群體調(diào)查,建立不同民族

2、基因數(shù)據(jù)庫。直至目前中國人群HLA基因座基因多態(tài)性和分布頻率的研究尚未充分進(jìn)行,而四川漢族HLA-DRB1基因的分型資料更是空白。而目前對(duì)于HLA的研究,存在各種以PCR為基礎(chǔ)的基因分型方法,雖比以往血清學(xué)和細(xì)胞學(xué)的方法大有改進(jìn),但仍覺繁瑣,因此有必要尋找新型的方法,使研究工作更簡(jiǎn)便有效。此次應(yīng)用新的DNA分型技術(shù)分析成都漢族個(gè)體HLA-DRB1等位基因分布頻率,使以后HLA的研究工作更為快捷高效,同時(shí)為進(jìn)一步研究HLA-DRB1與人體

3、特異性免疫應(yīng)答和疾病的關(guān)聯(lián)提供背景資料。
　　材料與方法:
　　1)材料:
　?、贅悠?四川成都地區(qū)三代以內(nèi)無血緣關(guān)系的漢族健康個(gè)體的外周血標(biāo)本90份各2mL,以EDTA抗凝,年齡22-67歲,男36例,女54例。②工具酶與生化試劑:10×Buffer,25 mM MgCl2,2.5 mM dNTPs, TaqDNA聚合酶。無水乙醇、飽和酚,氯仿,濃鹽酸,氯化鈉,Tris、EDTA,瓊脂糖。
　　2)方法:

4、>　?、倩蚪MDNA的提取。
　?、贖LA-DRB1基因分型方法:將設(shè)計(jì)合成的8個(gè)引物和其它反應(yīng)物放在一個(gè)反應(yīng)管中擴(kuò)增,然后將擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖電泳,陽性產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序,對(duì)90名無血緣關(guān)系的健康個(gè)體進(jìn)行HLA-DRB1基因分型。
　　結(jié)果:
　　共檢出39種 HLA-DRB1等位基因,基因頻率較高的有HLA-DRB1*0901(26.11％),1202(7.22%),同時(shí)檢測(cè)出HLA-DRB1*AHAW、HLA-DRB1

5、*DRw12、HLA-DRB1*w13b等少見等位基因。統(tǒng)計(jì)分析表明該群體 HLA-DRB1位點(diǎn)的基因型分布符合 Hardy Weinburg平衡(χ2=806.46,df=780,P>0.05)。
　　結(jié)論:
　?、僮C實(shí)了單管PCR擴(kuò)增測(cè)序分型法用于HLA-DRB1基因分型的可靠性和適用性,比以往其它的SBT-PCR的方法簡(jiǎn)便快捷和高效。
　?、谔峁┝顺啥紳h族群體的基因分布頻率資料,為進(jìn)一步研究 HLA-DRB1與人