HLA-DRB1及TLR9基因多態(tài)性與急性胰腺炎相關性的研究.pdf

1、【背景】急性胰腺炎是一種危害人類健康的常見外科疾病，重型急性胰腺炎病死率居高不下，其發(fā)病機理尚未闡明，仍是跨世紀的醫(yī)學難題。 急性胰腺炎的疾病進程在臨床上表現(xiàn)出極強的異質性，其高危人群的個體易感性以及對治療反應的個體差異性是由致病因素、環(huán)境以及機體的免疫狀態(tài)相互作用決定的，而機體免疫狀態(tài)的個體差異源于個體遺傳因素的差別。個體遺傳因素中包括參與先天或獲得性免疫反應的分子及識別受體的遺傳多態(tài)性，這些遺傳多態(tài)性可能影響急性胰腺炎的發(fā)生

2、并與疾病進程相關聯(lián)，還可能與急性胰腺炎進程中的特定并發(fā)癥的出現(xiàn)相關聯(lián)。 HLA是迄今所知最為復雜的遺傳多態(tài)性系統(tǒng)，是調控人體特異性免疫應答和決定疾病易感性個體差異的主要基因系統(tǒng)。HLA-DR抗原是最主要的MHCⅡ類分子，在抗原識別、遞呈、免疫應答與調控等方面起著非常重要的作用。決定其特異性的主要編碼基因HLA-DRB1座位具有高度多態(tài)性，不同地域和種族人群HLA-DRB1等位基因頻率分布的差異較大，并與多種胰腺疾病(糖尿病、胰腺

3、癌和慢性胰腺炎等)相關聯(lián)，但至今尚未見HLA-DRB1基因多態(tài)性與急性胰腺炎相關性的研究報道。 Toll樣受體是生物進化過程中一種古老的天然免疫受體，不僅能識別外源性微生物，而且能識別內源性有害物質的刺激，產生不同形式與不同程度的炎癥反應。免疫細胞通過TLR9識別CpGDNA激活細胞內信號轉導，活化轉錄因子NF-kB，導致炎癥介質大量釋放，可引起急性炎癥反應，甚至發(fā)展為全身炎癥反應綜合征(SIRS)。TLR9盡管是保守的先天性免

4、疫系統(tǒng)的主要功能識別受體之一，但也存在基因變異和遺傳多態(tài)性，且與哮喘等一些過度炎癥相關聯(lián)。而急性胰腺炎中胰腺的自身消化以及嚴重的過度炎性反應——SIRS是否也與TLR9的基因突變相關尚待澄清。 【目的】①建立HLA-DRB1SBT一步分型方法，通過對HLA-DRB1的基因分型，研究HLA-DRB1座位上的等位基因頻率在成都地區(qū)漢族正常健康人群和急性胰腺炎人群的分布差異，旨在探討與急性胰腺炎發(fā)生相關聯(lián)的抗性和/或易感基因；另外，通

5、過對成都地區(qū)漢族的輕型急性胰腺炎、重型急性胰腺炎二組患者的HLA-DRB1基因多態(tài)性的比較分析，探討HLA-DRB1基因多態(tài)性對急性胰腺炎疾病進程的影響。②建立實時熒光定量PCR法檢測TLR9基因在-1237位點的多態(tài)性，研究在正常健康人和急性胰腺炎病人之間，以及輕型急性胰腺炎病人與重型急性胰腺炎病人之間，是否存在TLR9核苷酸序列的差異，同時探討TLR9的基因突變與急性胰腺炎疾病進程的關系。 【方法】①樣本來源：成都地區(qū)漢族急

6、性胰腺炎病人131例(輕型急性胰腺炎67例，重型急性胰腺炎64例)作為實驗組，正常健康人90例作為對照組。②改進SBT基因分型技術，建立準確高效的PCR-STAmp法進行HLA-DRB1基因分型，獲得成都地區(qū)漢族正常健康人群和急性胰腺炎人群HLA-DRB1的基因分布頻率，利用POPGENE統(tǒng)計軟件對正常健康人群進行H-W平衡分析，卡方檢驗分析HLA-DRB1座位上的等位基因頻率在成都地區(qū)漢族正常健康人群和急性胰腺炎人群的分布差異，并進一

7、步對輕型急性胰腺炎、重型急性胰腺炎二組患者的HLA-DRB1基因多態(tài)性進行比較分析。③采用實時熒光定量PCR法(SYBR-GreenⅠ熒光染料DNA結合染色法)檢測TLR9基因在-1237位點的多態(tài)性，比較分析TLR9基因在-1237位點的等位基因頻率在正常健康人和急性胰腺炎病人之間，以及輕型急性胰腺炎病人與重型急性胰腺炎病人之間，是否存在分布差異。 【結果】①通過病例-對照研究，HLA-DRB1*0406和HLA-DRB1*1

8、405等位基因在急性胰腺炎組的分布頻率顯著性高于正常對照組(HLA-DRB1*0406：P=0.03＜0.05，RR=3.05＞1，95％CI＞1；HLA-DRB1*1405：P=0.04＜0.05，RR=7.84＞1，95％CI＞1)，差異有統(tǒng)計學意義。②HLA-DRB1*0411等位基因在正常對照組的基因頻率分布顯著性高于急性胰腺炎組(P=0.03＜0.05，RR=0.17＜1，95％CI＜1)，差異有統(tǒng)計學意義。③與重型急性胰腺炎

9、組相比，HLA-DRB1*1101等位基因在輕型急性胰腺炎組的分布頻率較高(P=0.03＜0.05，RR=0.45＜1，95％CI＜1)，差異有統(tǒng)計學意義。④本研究對TLR9基因多態(tài)性(-1237)的熒光PCR檢測結果顯示，C等位基因頻率在急性胰腺炎組的分布(15.3％)高于正常對照組(10.6％)，C等位基因頻率在重型急性胰腺炎(SAP)組的分布(18.9％)亦高于輕型急性胰腺炎(MAP)組(11.9％)，但經統(tǒng)計學分析，上述差異均無

10、顯著性(P＞0.05)。⑤在重型急性胰腺炎病人中，與無繼發(fā)感染組(15.8％)相比，繼發(fā)感染組(23.9％)的TLR9基因-1237位點的C等位基因頻率有增高趨勢，但無顯著性差異(P＞0.05)；與無繼發(fā)全身炎癥反應綜合征組(7.9％)相比，C等位基因頻率在繼發(fā)全身炎癥反應綜合征組(23.3％)明顯增高，差異具有顯著性(P＜0.05，OR=3.01＞1，95％CI＞1)。 【結論】①PCR-STAmp法改進了繁瑣的傳統(tǒng)SBT技術

11、，具有高特異性、高分辨率和高效率的特點，并成功應用于HLA-DRB1基因分型，該方法在國內尚未見報道，值得推廣應用。②本研究首次對成都地區(qū)漢族群體HLA-DRB1基因與急性胰腺炎的關聯(lián)進行了研究，發(fā)現(xiàn)HLA-DRB1*0406和HLA-DRB1*1405可能為成都地區(qū)漢族群體急性胰腺炎的易感基因，HLA-DRB1*0411可能為成都地區(qū)漢族群體急性胰腺炎的抗性基因，而HLA-DRB1*1101則可能為成都地區(qū)漢族群體急性胰腺炎疾病進程中