沙咪珠利抗柔嫩艾美耳球蟲作用機理的初步研究.pdf

1、雞球蟲病是由艾美耳屬球蟲引起的一種原蟲病。其中，柔嫩艾美耳球蟲（ Eimeria tenella, E.tenella）是致病性最強的病原之一，常造成很高的發(fā)病率和死亡率，每年給養(yǎng)禽業(yè)造成巨大的經(jīng)濟負擔。目前雞球蟲病防治以藥物為主，但耐藥性的產(chǎn)生給球蟲病的防治帶來很大困難。因此積極尋找新型的抗球蟲藥物及藥物作用機制的闡明迫在眉睫。
　　沙咪珠利是本實驗室自主合成的一種新型三嗪類抗球蟲化合物，前期研究表明其具有廣闊的開發(fā)前景。為了解

2、沙咪珠利的初步作用機制，我們探討了沙咪珠利抗E.tenella的作用階段和峰期、沙咪珠利對E.tenella超微結構的影響和主要作用位點，以及沙咪珠利對與作用位點功能相關的兩個重要代謝酶的影響。結果如下：
　　1.在沙咪珠利抗E.tenella的作用階段和峰期研究中，采用分別在感染前2d（組1）、1d（組2）、感染當天（組3）、感染后1d（組4）、2d（組5）、3d（組6）、4d（組7）開始給予沙咪珠利，每組連續(xù)給藥3d，同時設置

3、地克珠利對照組、感染對照組和空白對照組。結果，組1、組2和組3的抗球蟲指數(shù)（Anticoccidial Index，ACI）分別為104±11、92±11和125±16，基本無抗球蟲活性；組4、組5、組6和組7的ACI分別為170±8、191±5、171±4、161±5，達到中效和高效抗球蟲活性，而地克珠利對照組、感染對照組和空白對照組ACI分別為181±14、73±31和200±2。上述數(shù)據(jù)表明沙咪珠利在感染后第2d開始連續(xù)給藥3d抗

4、球蟲活性最高，對應的藥物作用峰期為球蟲的裂殖生殖和配子生殖階段。
　　2.在沙咪珠利對E.tenella超微結構影響和作用位點的研究中，采用在感染后不同時間點單次灌服15mg/kg沙咪珠利，給藥后16h剖殺雞只，采集盲腸組織，制作超薄切片并觀察，發(fā)現(xiàn)沙咪珠利對E.tenella裂殖生殖和配子生殖階段超微結構均有影響：第二代裂殖體和小配子體分化被抑制，裂殖子和小配子體外膜起泡和核周間隙膨大，且裂殖子形態(tài)多不規(guī)則。小配子體的異常外凸引

5、起了小配子體的退化，大配子體中壁形成體2（Wall formation body2, WFB2）異常，阻礙了卵囊壁形成，進一步引起合子退化。此外，線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體也發(fā)生了不同程度的異常。
　　3.烯醇酶（enolase）是一個多功能蛋白，在除糖酵解以外的其它多種生物學過程中也發(fā)揮著重要作用。為了解enolase在E.tenella中的藥物影響和相關功能，我們分別采用了Real-time PCR、Western Blot和免

6、疫熒光探索了沙咪珠利對E.tenella第二代裂殖子enolase的影響。結果表明沙咪珠利在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平上均下調(diào)了enolase的表達；免疫熒光分析顯示enolase主要分布于第二代裂殖子的頂端，且與對照組相比，沙咪珠利組熒光強度明顯減弱。
　　4.乳酸脫氫酶（LDH）是糖酵解中一個重要的蛋白酶，在多數(shù)寄生蟲研究中有著重要的意義。本試驗通過Real-time PCR、Western Blot、免疫熒光、LDH活性檢測和caspa