鋁致SH-SY5Y細(xì)胞Tau蛋白過(guò)度磷酸化的機(jī)制及p25-Cdk5相關(guān)信號(hào)通路的作用.pdf

1、目的：利用SH-SY5Y細(xì)胞研究鋁致Tau蛋白過(guò)度磷酸化的機(jī)制，及p25/Cdk5相關(guān)信號(hào)通路在鋁致tau蛋白異常磷酸化過(guò)程中的作用。
　　 方法：
　　 1.培養(yǎng)SH-SY5Y細(xì)胞，建立鋁誘導(dǎo)神經(jīng)元損傷的細(xì)胞模型，實(shí)驗(yàn)分為空白對(duì)照組、200μMAlCl3組、400μMAlCl3組、800μMAlCl3組，染毒48h后，CCK-8試劑盒檢測(cè)細(xì)胞活力；ELISA檢測(cè)細(xì)胞總tau蛋白，Tau[pS396]，Tau[pT231

2、]，Tau[pT181]的含量；Fluo3-AM標(biāo)記細(xì)胞后，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)鈣離子的濃度；Western-blot檢測(cè)p25蛋白表達(dá)水平；Elisa檢測(cè)細(xì)胞中鈣蛋白酶，Cdk5的含量；
　　 2.采用Cdk5特異性的抑制劑Roscovitine拮抗Cdk5后，ELISA檢測(cè)細(xì)胞總Tau蛋白，Tau[pS396]，Tau[pT231]，Tau[pT181]的含量分析其對(duì)Tau蛋白磷酸化的影響。
　　 結(jié)果：
　　

3、 1.CCK-8檢測(cè)后顯示，隨著氯化鋁作用濃度的增高，SH-SY5Y細(xì)胞活力逐漸下降,400μMAlCl3組，800μMAlCl3組細(xì)胞活力明顯低于空白對(duì)照組（P＜0.05），光鏡下觀察，隨著氯化鋁作用濃度的增高，SH-SY5Y細(xì)胞損傷也逐漸加重。
　　 2.Tau蛋白和磷酸化Tau蛋白結(jié)果顯示：氯化鋁染毒后，各組SH-SY5Y細(xì)胞總tau蛋白的含量沒(méi)有差異；200μMAlCl3組,400μMAlCl3組，800μMAlCl3

4、組細(xì)胞tau蛋白在Ser396，Thr231和Thr181位點(diǎn)的磷酸化水平明顯高于對(duì)照組(P＜0.05)。
　　 3.p25/Cdk5相關(guān)信號(hào)通路檢測(cè)結(jié)果顯示：隨著氯化鋁作用濃度增加，細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度明顯升高(P＜0.05)；calpain的含量明顯升高(P＜0.05)；800μMAlCl3組p25蛋白表達(dá)水平明顯高于空白對(duì)照組(P＜0.05)；Cdk5的含量明顯升高（P＜0.05）
　　 4.Roscovitine拮抗

5、Cdk5后，氯化鋁導(dǎo)致的SH-SY5Y細(xì)胞Tau蛋白在Ser396，Thr231和Thr181位點(diǎn)的磷酸化水平均明顯低于400μMAlCl3組（P＜0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1.氯化鋁能降低SH-SY5Y細(xì)胞活力，對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞有毒性作用。
　　 2.氯化鋁能使SH-SY5Y細(xì)胞Tau蛋白在Ser396，Thr231，Thr181位點(diǎn)過(guò)度磷酸化。
　　 3.鋁導(dǎo)致的SH-SY5Y細(xì)胞Tau蛋