洛鉑對肺癌A549細胞作用的初步探討.pdf

1、目的：肺癌是全球發(fā)病率最高的惡性腫瘤之一，已成為目前人類因腫瘤死亡的主要原因，在我國農(nóng)村和城市近20年來已成為發(fā)病和死亡上升幅度最大的疾病，大多數(shù)患者就診時已喪失了手術機會，只有少數(shù)患者能進行手術治療，因此化學治療在肺癌的治療中起著非常重要的作用。順鉑（cDDP）是目前發(fā)現(xiàn)的抗癌活性最強的藥物之一，被認為是治療非小細胞肺癌（NSCLC）一線方案中最主要的組成部分，但由于其嚴重的肝腎毒性和血液系統(tǒng)毒性使其在臨床的應用受到限制，并且存在原發(fā)

2、和繼發(fā)性耐藥，因此研發(fā)高療效低毒性的鉑類制劑一直是學者們努力的方向，洛鉑（Lobalplatin）化學名為1，2二氨甲基-環(huán)丁烷-乳酸合鉑，是繼順鉑和卡鉑之后的第三代鉑類衍生物，其最主要的優(yōu)點是治療劑量下腎毒性和血液學毒性小及較輕的胃腸道反應，可用于乳腺癌、肺癌和慢性粒細胞白血病等的化療治療。
　　 細胞凋亡是細胞自然死亡的一種主要形式，由凋亡相關基因控制，是維持機體自身平衡的重要機制.近年研究表明，細胞凋亡受抑制參與形成腫瘤，

3、大多數(shù)化療藥物通過誘導細胞凋亡起作用。因此對化療藥物細胞凋亡的研究具有十分重要的理論價值和臨床指導作用。Bcl-2是B細胞淋巴瘤/白血病-2（B-cell lymphma/leukemia-2）的縮寫。Bcl-2對細胞凋亡有明顯的抑制作用，降低bcl-2的表達有利于細胞凋亡。Bcl-2表達降低參與化療藥物引起的細胞凋亡，因此對Bcl-2的研究成為腫瘤細胞凋亡研究的熱點。
　　 本實驗以洛鉑為研究對象，以肺癌細胞株A549為模型，

4、采用MTT比色法、流式細胞技術檢測洛鉑對肺癌細胞的增殖抑制、細胞周期阻滯、誘導細胞凋亡等作用，應用蛋白印跡法和免疫細胞化學法分析洛鉑對bcl-2蛋白表達的影響。為洛鉑在肺癌化療中的應用提供相應的理論基礎和實驗依據(jù)。
　　 方法：（1）取對數(shù)生長期的肺癌A549細胞進行實驗，實驗分組為：空白對照組（培養(yǎng)液）；陰性對照組（培養(yǎng)液+細胞）；實驗組（培養(yǎng)液+細胞+不同濃度洛鉑）；將各組分別培養(yǎng)24、48和72小時。
　　 （2）

5、倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況及細胞形態(tài)學變化。
　　 （3）應用MTT比色法檢測洛鉑對肺癌A549細胞增殖的影響。
　　 （4）應用流式細胞儀檢測細胞周期和細胞凋亡率的變化和影響。
　　 （5）應用蛋白印跡法分析洛鉑對Bcl-2蛋白表達的影響。
　　 （6）統(tǒng)計學處理：采用SPSS統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計學處理。
　　 結果：洛鉑能抑制肺癌A549細胞的增殖；經(jīng)洛鉑處理A549細胞后，光鏡下可見到明顯的

6、凋亡細胞；細胞周期的G1期前有低于二倍體細胞的凋亡峰；蛋白印跡檢測表明洛鉑可使bcl-2表達下降。
　　 （1）倒置顯微鏡下每天察陰性對照組、各度實驗組細胞大小和形態(tài)變化。陰性對照組肺癌A549細胞呈梭形，以貼壁方式生長，細胞輪廓清晰，細胞間結構緊密，生長旺盛。濃度為2.5μmol/L和5μmol/L洛鉑作用24h后可見少量細胞變圓、體積增大，大部分細胞仍貼壁生長，作用48h、72h后細胞縮小變圓，部分積聚成團。10μmol/L

7、洛鉑作用24h后可見變圓細胞逐漸增多，貼壁生長細胞數(shù)量減少，脫壁漂浮的小圓球細胞及細胞碎片逐漸增多，48h可見變圓細胞較前增多，貼壁生長細胞減少，漂浮的小圓球細胞和細胞碎片增多，72h后可見大部分細胞積聚成團。
　　 （2）應用MTT比色法檢測洛鉑在不同濃度、不同時間對肺癌A549細胞株增殖的抑制作用，A549細胞出現(xiàn)明顯的增殖抑制，增殖抑制程度依賴于藥物濃度，隨濃度的升高和作用時間的延長而增大，具有呈時間和劑量依賴性。

8、　　 （3）洛鉑對A549細胞周期變化的影響：洛鉑可以對肺癌A549細胞產(chǎn)生細胞周期阻滯。
　　 （4）洛鉑對A549細胞凋亡率的影響：結果表明洛鉑可以誘導肺癌細胞凋亡，而且隨著藥物濃度和作用時間的增加，凋亡率逐漸增加，呈時間和劑量依賴關系。
　　 （5） Western-blot檢測Bcl-2蛋白的表達可見隨洛鉑濃度的增高，凋亡率增高，Bcl-2的表達逐漸降低。提示我們洛鉑誘導的細胞凋亡與Bcl-2蛋白的表達有一定關