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文檔簡介
1、目的:采用Western Blot、RT-PCR等分子生物學(xué)技術(shù),檢測在Ca2+拮抗劑A23187誘導(dǎo)下,人肺腺癌細(xì)胞系SPCA-1中糖調(diào)節(jié)蛋白78(GRP78)的表達(dá)水平,并分析其表達(dá)在肺腺癌細(xì)胞對順鉑耐藥中的作用。 方法:根據(jù)誘導(dǎo)劑A23187(0、1、2、4、6μM)的濃度進(jìn)行細(xì)胞分組。采用RT-PCR、Western雜交檢測各組細(xì)胞中GRP78在核酸和蛋白水平的表達(dá),同時利用MTT法(四甲基偶氮唑鹽法)測定細(xì)胞在順鉑作用
2、下的生存率。根據(jù)蛋白的表達(dá)情況及細(xì)胞的生存率,闡明GRP78在肺癌對順鉑耐藥中的作用。 結(jié)果:A23187可以明顯誘導(dǎo)人肺腺癌細(xì)胞SPCA-1中GRP78在核酸和蛋白水平的表達(dá),且其表達(dá)水平與A23187具有一定的濃度依賴性。MTT法顯示:A23187濃度在1μM時,細(xì)胞生存率明顯高于對照組,但隨濃度增加(2,4,61μM)表現(xiàn)為細(xì)胞生存率較對照組明顯降低,且生存率降低的程度與A23187濃度相關(guān),SPCA-1細(xì)胞生存率與GRP
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